Милалаб ифа анти hcv инструкция

Т.Д, Григорьева, к.м.н., зав. ГКДЦ (вирусологический)

М.Ю. Фалилеева, врач клинической лабораторной диагностики ГКДЦ (вирусологический)

Е.П. Шаргородская, к.м.н., врач клинической лабораторной диагностики ГКДЦ (вирусологический)

СПб ГБУЗ «Клиническая инфекционная больница имени С.П. Боткина», г. Санкт-Петербург

Possibilities of using new test system for screening antibodies to hepatitis C produced by Alkor Bio company by ELISA during comparative laboratory tests

T.D. Grigorieva, M.Yu. Falileeva, E.P. Shargorodskaya

Clinical Infectious Diseases Hospital n.a. S.P. Botkin, Saint Petersburg, Russia

Резюме

В настоящее время, несмотря на большое разнообразие методов и тестов для скрининга сывороток крови на антитела к ВГС, нет надежных критериев, гарантирующих получение достоверного результата. На сегодняшний день интерпретация результатов детекции антиВГС в образцах с низкими значениями КП (невысокой оптической плотностью в ИФА) остается серьезной задачей лабораторной диагностики. Одной из приоритетных задач для производителей современных тест-систем остается постоянное повышение аналитической чувствительности и специфичности лабораторных тестов. Целью данной статьи являлась оценка специфичности и чувствительности новой тест-системы «ГепатитИФА-анти-HCV» производства «Алкор Био» при сравнении с тест-системами других производителей в постановках с сыворотками реальных пациентов и в серии контрольных сероконверсионных панелей. Статья предназначена для врачей клинической лабораторной диагностики, эпидемиологов, вирусологов, инфекционистов, студентов медицинских и биологических вузов.

Ключевые слова: вирус гепатита С, маркеры гепатита С, иммунологические и молекулярно-генетические методы диагностики, чувствительность тест-системы, коэффициент позитивности, иммуноферментный анализ.

Summary

Currently, despite the wide variety of methods and tests for screening blood serum for antibodies to HCV, there are no reliable criteria that guarantee a reliable result. To date, the interpretation of the results of anti-HCV detection in samples with low CP values (low optical density in ELISA) remains one of the major tasks of laboratory diagnostics. Continuous improvement of analytical sensitivity and specificity of laboratory tests remains one of the priority tasks for manufacturers of modern test systems. The purpose of this article was to assess the specificity and sensitivity of the new Hepatitis ELISA-anti-HCV test system produced by Alkor Bio when compared with test systems from other manufacturers in settings with sera from real patients and in a series of control seroconversion panels. The article is intended for doctors of clinical laboratory diagnostics, epidemiologists, virologists, infectious disease specialists, students of medical and biological universities.

Key words: hepatitis C virus, hepatitis C markers, immunological and molecular and genetic methods of diagnostics, test system sensitivity, positivity coefficient, linked immunosorbent assay.

Вирусный гепатит С до настоящего время остается серьезной эпидемиологической проблемой. Ежегодно, по данным ВОЗ, от осложнений данной инфекции умирают около 700 тысяч человек. Эпидемиологический процесс характеризуется как острыми, так и хроническими (преимущественно) формами гепатита, а также манифестным или скрытым течением инфекции [13]

Для лабораторной диагностики вирусного гепатита С используются серологические и молекулярно-биологические методы исследования.

Серологическим методом в сыворотке крови определяют наличие антител класса G к ВГС. Этот метод является самым доступным и экономически выгодным. Современные наборы для ИФА-диагностики на сегодняшний день отличаются высокой специфичностью и чувствительностью, однако при использовании любого ИФА-теста может быть получен как ложноположительный, так и ложноотрицательный результат, причем удельный вес ложноположительных результатов будет зависеть от многих факторов (специфичности теста, обследуемого контингента, качества анализируемого образца и т. д.) [3].

Для подтверждения положительного результата согласно санитарно-эпидемиологическим правилам СП 3.1.311213 «Профилактика вирусного гепатита С» обязательным является определение антител к индивидуальным белкам ВГС (core, NS3, NS4, NS5) с помощью тест-систем на основе ИФА или метода иммуноблота. При проведении иммуноблота используются нитроцеллюлозные полоски, на которых адсорбированы рекомбинантные белки и (или) синтетические пептиды. В связи с более низкой чувствительностью данного метода ряд авторов отмечают вероятность появления ложноотрицательных результатов [4].

В настоящее время нет надежных критериев, гарантирующих получение достоверного результата на антиВГС ни методом ИФА, ни методом ИХЛА, ни методом иммунного блота. По многочисленным литературным данным, при исследовании образцов, содержащих низкие концентрации антиВГС или антитела с низкой авидностью, в тест-системах разных производителей разница в результатах исследования может достигать значительных величин (20–30%).[6, 7] Это может быть связано с тем, что при производстве тест-систем для ИФА или иммунного блота используются разные рекомбинантные белки и синтетические пептиды, адсорбируемые в качестве антигенов, а также с феноменом так называемого неспецифического связывания рекомбинантных антигенов и синтетических белков с белками крови пациентов [10, 11, 12] Таким образом, результаты лабораторных обследований могут интерпретироваться следующим образом: «позитивный/положительный», «негативный/отрицательный» и неопределенный (в соответствии с соглашением, достигнутым на Российском консенсусе по вирусному гепатиту С, 2000) [5, 3].

Анализируя инструкции производителей разных тест-систем, можно проследить, какие полипептиды или рекомбинантные белки используют чаще. Это АГ core, NS3, NS4. Российские производители, как правило, в этот список включают и АГ NS5, в то время как такие крупные и признанные компании, как Roche Diagnostics (тест-система «Анти-HCV-II» для анализатора cobas Elecsys) и Abbott Diagnostics (тест-система «Анти-HCV для анализатора Architect») не имеют данного пептида в составе своих тест-системах. Сероконверсия при гепатите С редко начинается с появления первых антител к АГ-NS5, однако такое встречается и существуют сероконверсионные панели, где наличие антител в образцах подтверждено с помощью иммунного блота и сероконверсия начинается с антител к АГ-NS5, при этом инфицирование подтверждено методом ПЦР (панель производства SeraCare PHV922). Поэтому не всегда корректно, получив положительный результат в российской тест-системе, а затем отрицательный для того же образца в тест-системе, например, Anti-HCVIIcobas Elecsys или «Анти-HCV Abbott Diagnostics», считать первоначальный результат ложноположительным.

Целью данной работы была попытка оценить специфичность и чувствительность новой тест-системы «ГепатитИФА-анти-HCV» производства «Алкор Био» при сравнении с тест-системами других производителей в постановках с сыворотками реальных пациентов и в серии контрольных сероконверсионных панелей.

Материалы и методы

Скрининг сывороток крови на антитела к ВГС проводился с использованием следующих наборов для ИФА («ГепатитИФА-анти-HCV Алкор Био», «ИФА-АНТИ-HCV Диагностические системы», «ДС-ИФА-АНТИ-НСV-СПЕКТР-GM Диагностические системы»», «БЕСТ анти-ВГС Вектор-Бест», «БЕСТ анти-ВГС-спектр Вектор-Бест») и для ИХЛА («Анти-HCV Abbott Diagnostics», «Anti-HCV II cobas Elecsys). Подтверждающий тест также дополнялся иммунным блотом ЗАО «ЭКОлаб». Пробы тестировали в течение 72 часов или аликвотировали и замораживали для дальнейших исследований (повторное замораживание не допускалось). Часть проб тестирована в ПЦР. Для уточнения специфичности тест-системы «ГепатитИФА-анти-HCV Алкор Био» использовались клинические образцы, отрицательные в тест-системе «Анти-HCV Abbott Diagnostics», и в нескольких случаях получали положительный результат в тест-системе «ГепатитИФА-анти-HCV» производства «Алкор Био», который затем подтверждался в тестах других производителей.

Пример 1

В клинико-диагностической лаборатории было отобрано 89 образцов, положительных по результатам тестирования одной из тест-систем производства «Диагностические системы» (ДС) и (или) Abbott Diagnostics с подтверждением в тест-системах «БЕСТ анти-ВГС-спектр Вектор-Бест2 и (или) в иммуноблоттинге («Лайн-Блот ВГС» компании «ЭКОлаб»). Данные образцы в дальнейшем были проанализированы в тест-системе «ГепатитИФА-анти-HCV» производства «Алкор Био». Для 81 образца результаты совпали с заключением лаборатории. Для 8 (8,9%) образцов результаты исследования были отрицательными и не совпали с данными, полученными при постановке проб на тест-системах других производителей (так называемая дискордантная проба). В дальнейшем те образцы, количество клинического материала в которых было достаточным, были дополнительно протестированы методом ПЦР и в тест-системе Anti-HCV IIcobas Elecsys. Результаты этих исследований представлены в табл. 1.

Таблица 1

Результаты сравнительного тестирования сывороток пациентов^*,**

Примечание: * – строка не заполнена, если образец не тестировали в данной тест-системе; ** – для ИФА и ИХЛА приведены коэффициенты позитивности, для анти-ВГС-спектр и иммуноблоттинга перечислены белки, с которыми образец оказался реактивным.

Пример 2

В клинико-диагностической лаборатории было отобрано 57 образцов (30 отрицательных и 27 положительных) по результатам исследований в тест-системе cobas Elecsys Anti-HCV II. Дополнительно образцы были протестированы в тест-системах других производителей. Получено 4 дискордантных образца (7,01%), результаты исследований которых представлены в табл. 2.

Таблица 2

Результаты сравнительного исследования дискордантных образцов

Примечание: * – строка не заполнена, если образец не тестировали в данной тест-системе. ** – для ИФА и ИХЛА приведены коэффициенты позитивности.

Пример 3

В лаборатории ГКДЦ (вирусологической) были отобраны 42 образца, охарактеризованных как слабоположительные и сомнительные при тестировании набором «МилаЛаб-ИФА-АНТИ-HCV Диагностические системы» в подтверждающем тесте «Бест анти-ВГС-спектр Вектор-Бест», часть в дальнейшем исследовалась в «Лайн-Блоте ВГС» ЭКОлаб и методом «ИХЛА Анти-HCV Abbott Diagnostics». При постановке ИФА набором «ГепатитИФА-анти-HCV Алкор Био» 10 образцов были охарактеризованы как отрицательные.

Таблица 3

Результаты сравнительного исследования слабоположительных сывороток

Примечание: * – строка не заполнена, если образец не тестировали в данной тест-системе. ** – для ИХЛА приведены коэффициенты позитивности, для ИФА – ОП образца, для анти-ВГС-спектр и иммуноблоттинга перечислены белки, с которыми образец оказался реактивным.

Зачастую при валидации новых тест-систем клинические лаборатории используют в сравнительных постановках слабоположительные образцы от пациентов, чей статус в отношении заболевания вирусным гепатитом С неизвестен, и опираются только на значения, полученные в постановках на тест-системах, имеющихся в наличии. Из приведенных примеров видно, что без окончательного клинического диагноза в некоторых случаях довольно бессмысленно сравнивать тест-системы между собой. Для уточнения чувствительности тест-системы методически верным будет оперировать чувствительностью по сероконверсионным панелям, а при сомнительном диагнозе – дополнительно тестировать пациента некоторое время спустя, как прописано в санитарно-эпидемиологических правилах СП 3.1.311213 «Профилактика вирусного гепатита С». В исследованиях других авторов отмечается, что скрининг, проведенный с применением двух и более тест-систем ИФА, может приводить к появлению образцов, для которых невозможно установить окончательный серологический диагноз [11]. При двухэтапном тестировании, предложенном ВОЗ, предлагается последовательное использование двух ИФА тест-систем, сравнимых по чувствительности и специфичности, причем второй используется только для положительных в первичном тестировании образцов. [12]

«ГепатитИФА-анти-HCV Алкор Био» – тест, известный короткими стадиями основных инкубации (двухстадийный тест за час), и тем, что все реагенты в нем готовы к использованию, их не надо предварительно разводить. В 2020 году в «Алкор Био» завершилось обновление тест-системы «ГепатитИФА-анти-HCV», а основной характеристикой для улучшения явилась специфичность набора. Известный факт, что при нанесении на планшет структурного Core и неструктурных белков NS3, NS4, NS5 огромную роль играют соотношения этих компонентов на планшете для обнаружения всех основных форм и стадий гепатита С и равномерность их нанесения на планшет, именно в этом состоит искусство разработки скринингового теста на гепатит С [9]. Довольно часто сами системы для получения пептидов и рекомбинантных белков могут вносить интерференцию и служить источником неспецифического сигнала, поэтому качественная очистка самих антигенов играет ключевую роль в повышении специфичности, и соответственно бóльшая часть работ посвящены именно очистке антигенов. Поэтому компанией «Алкор Био» были проведены многократные постановки, позволяющие четко откорректировать концентрации, влияющие на баланс чувствительности и специфичности и открытие разных видов и типов панелей. Также хорошие результаты равномерного нанесения антигенов на планшет были получены благодаря использованию высокотехнологичных автоматических линий нанесения производства США, установленных на производственной площадке компании.

Еще одной задачей, которую поставила компания «Алкор Био», явилась работа по повышению чувствительности тест-системы «ГепатитИФА-анти-HCV». Чтобы ее улучшить, необходимо было повысить число ковалентных связей АГ–АТ, что в конечном итоге должно привести к усилению основного сигнала. Для решения этой проблемы большую роль играет аналитический буфер, а именно его способность максимально создавать для выделения оптимальную среду. Обновленный состав буфера дополнительно оказал влияние и на элиминацию ревматоидного фактора, что позволило осуществить более полное выделение антител и повысить специфичность теста (табл. 4). В качестве примера приведены результаты сравнительных постановок панелей слабоположительных образцов двумя вариантами набора «ГепатитИФА-анти-HCV Алкор Био» (предыдущей версии и набора с улучшенными характеристиками).

Таблица 4

Результаты исследования слабоположительных сывороток

Примечание: * – коэффициент позитивности, полученный при постановках набором «ГепатитИФА-анти-HCV Алкор Био» предыдущей версии; ** – коэффициент позитивности, полученный при постановках набором «ГепатитИФА-анти-HCV Алкор Био» последней версии; *** – КВ для данной серии измерений – 5%, ОП крит. – 0,205.

Также при постановке в панелях образцов отмечено следующее: в целом имеется увеличение КП при работе набором «ГепатитИФА-анти-HCV» улучшенной версии, что позволяет в ряде случаев судить об образце не как о сомнительном, а как о положительном, что подтверждается в постановках на тест-системах других производителей (табл. 5).

Таблица 5

Результаты исследования панелей сывороток с различными генотипами ВГС

Примечание: *– коэффициент позитивности, полученный при постановках набором «ГепатитИФА-анти-HCV Алкор Био» предыдущей версии; ** – коэффициент позитивности, полученный при постановках набором «ГепатитИФА-анти-HCV Алкор Био» последней версии; ***КВ для данной серии измерений – 5%, ОП крит. – 0,205.

Таким образом, в новой версии набора оказался выравнен баланс между чувствительностью и специфичностью, и теперь чувствительность и специфичность, прописанные в инструкции к «ГепатитИФА-анти-HCV Алкор Био», полностью соответствуют заявленным.

Заключение

На сегодняшний день интерпретация результатов детекции антиВГС в образцах с низкими значениями КП (невысокой оптической плотностью в ИФА) остается одной из серьезных задач лабораторной диагностики. Постоянное повышение аналитической чувствительности и специфичности лабораторных тестов остается одной из приоритетных задач для производителей современных тест-систем. Постановка окончательного серологического диагноза может потребовать более углубленного обследования пациента и подразумевать комплексный подход. Тест-система «ГепатитИФА-анти-HCV» производства компании «Алкор Био» отвечает современным требованиям по специфичности и чувствительности и может быть рекомендована к использованию в качестве скрининговой для диагностики антиВГС в рутинной практике.

Список литературы

1. Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 3.1.3112-13 «Профилактика вирусного гепатита С»: Постановление главного государственного санитарного врача РФ от 22 октября 2013 г. № 58.
2. World Health Organization. Global hepatitis report. 2017. Р. 83.
3. Потапова А.А. Диагностическая значимость и интерпретация неоднозначных результатов исследования серологических маркеров вирусного гепатита С: Автореф. дис….д-ра биол. наук. Москва, 2015. 45 с.
4. Pereira F.M., Zarife M.A., Reis E.A. et al. // Rev. Soc. Bras. Med. Trop. 2014. V. 47. N 1. P. 12–17.
5. Кузина Л.Е., Ястребова О.Н., Садикова Н.В. и др. // Вопросы вирусологии. 2004. Т. 49. № 6. С. 41–44.
6. Евплова И.А., Быстрова Т.Н., Ефимов Е.И., Сенягина Н.Е. Сравнительная сероэпидемиологическая характеристика больных хроническим гепатитом С и лиц с «неопределенным» результатом на антитела к вирусу гепатита С. // Вестник Рос. военно-медиц. акад. 2008. № 2 (22). С. 434–435.
7. Потапова А.А., Шульгина М.М., Ермолаева М.И., Сюч Н.И. Алгоритм применения тестов для подтверждения результатов скрининга антител к вирусу гепатита С. // Новости «Вектор-Бест». 2017. № 1 (83). С. 8–11.
8. Москалев А.В., Астапенко П.В. Латентные формы вирусных гепатитов В и С. Оптимизация диагностики. // Вектор-Бест. 2009. С. 7–11.
9. Ястребова О.Н. Гепатит С. // Информационно методическое пособие. Новосибирск: ЗАО «Вектор-Бест», 2006. 44 с.
10. Le Page A.K., Robertson P., Rawlinson W.D. // J. Clin. Virol. 2013. V. 57. N 1. P. 19–23.
11. Кузина Л.Е., Ястребова О.Н., Садикова Н.В. и др. // Вопросы вирусологии. 2004. № 6. С. 41–44.
12. Потапова А.А., Ковальчук Л.В., Редченко Е.Б. и др. // Росс. аллергологический журн. 2007. № 3, приложение 1. С. 270.
13. Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика). М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2003. 384 с.
14. Рудой А.С., Москалев А.В., Астапенко П.В. Особенности иммунопатогенеза и диагностики латентных форм вирусных гепатитов В и С. // Медицинская иммунология. 2009. № 4–5. С. 394.
15. Мамедов М.К., Михайлов М.И. К истории открытия и изучения вируса гепатита С. // Мир вирусных гепатитов. 2010. № 2. С. 5–8.

Анти-HCV – анализ на гепатит С, назначаемый врачом в процессе диагностики вирусной инфекции. Тест основан на особенностях ответа иммунной системы человека при попадании патогена внутрь клеток. При этом происходит выброс в кровь биологически активных веществ – иммуноглобулинов (в медицинской литературе обычно обозначаются сокращенно Ig).

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Вырабатывающиеся антитела (АТ) специфичны, то есть их структура четко предопределена в зависимости от разновидности патогена. На этом и построен принцип серологического иммуноферментного исследования, которое получило название анализ ИФА анти-HCV.

Строение и содержание синтезирующихся иммуноглобулинов находится в прямой зависимости от структурных единиц вириона гепатита С. HCV (hepatitis C virus) представляет собой патоген округлой формы, диаметр не превышает 50 нм. В середине располагается одна нить РНК, покрытая капсидом (core-протеином). Снаружи его окружает оболочка, основу строения которой составляют липиды, а вкрапления гликопротеинов Е1 и Е2 имеют вид выступов.

Структуру генома вируса можно представить в виде схемы:

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Современный анализ HCV основан на выявлении нескольких маркеров инфекции. Это РНК вируса, core-антиген и специфические антитела. Раньше других в сыворотке крови определяется именно РНК ВГС (вирусного гепатита С). Второй по времени показатель – core-антиген. Его можно обнаружить через неделю после появления РНК в количестве достаточном, для идентификации тест-системами.

Чувствительность анализа на антиген вируса гепатита С зависит от механизма проведения исследования. При хемилюминесцентной детекции она значительно выше (до 0,06 пг/мл), чем при классической иммуноферментной реакции при помощи окисления хромогена пероксидазой. Но чем выше чувствительность анализа, тем дороже система для тестирования.

Уровень РНК вируса в крови тесно связан с концентрацией core-антигена. Так, некоторые методики позволяют определить приблизительную вирусную нагрузку с учетом коэффициента корреляции.

Специфические антитела к вирусу гепатита С определяются при помощи скрининговых иммуноферментных и иммуноблоттинговых тест-систем. Последние отличаются более высокой специфичностью.

Ориентировочный срок появления РНК вируса, антигена и различных типов иммуноглобулинов приведен в таблице:

Большинство применяемых в настоящее время тест-систем были разработаны еще в начале 1990-х годов. При необходимости диагностировать вирус используются антигены, полученные по образцам изолятов 1990-х, соответствующих HCV генотипа 1а. Уже есть информация об отсутствии у некоторых пациентов АТ к core-антигену – одному из самых иммуногенных антигенов ВГС. Это связывают с появлением определенных мутаций. Поэтому, чтобы исключить сомнительные результаты, следует обращаться в лаборатории, работающие с современными тест-системами (производства Abbott, Bayer и др.).

Существует несколько типов диагностических тестов на гепатит С, которые выполняются при помощи серологической иммуноферментной реакции.

Каждый из них дает специалисту определенную информацию. Это:

• предполагаемое наличие заболевания;
• форма течения вирусной инфекции;
• срок с момента инфицирования;
• реакция иммунной системы на проникновение патогена в кровоток;
• состояние пациента после приема медикаментов либо по итогам самостоятельного выздоровления после острой фазы заболевания.

Описание анализа на суммарные антитела

Исследование начинают с теста Anti-HCV Total, предназначенного для определения суммарных антител (IgG + IgM). Проведение других анализов целесообразно в том случае, если анти HCV положительный: что это значит, может определить только врач. Дело в том, что у некоторых пациентов отмечают ложноположительный результат, что требует дополнительного обследования.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Исследование на антитела к основным структурным белкам HCV

Наиболее показателен анализ крови на core-Ag. Иммуноглобулины к этой структурной субъединице появляются раньше других и служат специфическим лабораторным маркером инфицирования. Но вместе с тем, если АТ не обнаружены, это не исключает заражения. Отрицательный результат может быть обусловлен либо мутацией самого HCV, либо индивидуальными особенностями пациента.

Дальнейший скрининг на гепатит С включает анализ крови анти-HCV на определение спектра различных типов иммуноглобулинов. Так, обнаружение антител класса IgM свидетельствует об остром течении инфекции, анти – HCV IgG говорит в пользу длительной, хронической или латентной формы вирусного заболевания. Но расшифровку результатов должен проводить специалист, который объяснит, что это за анализ, и даст рекомендации по дальнейшему обследованию и лечению.

Точность

Точность иммуноферментного исследования зависит от производителя диагностических тест-систем. Не последнюю роль играет и профессионализм медицинского персонала. Специфичность и достоверность подобного исследования достигает 90%. Поэтому положительный анализ на гепатит С, проведенный серологическим методом, однозначно служит показанием для дальнейшей диагностики.

Но перед тем как сдавать кровь на HbsAg HCV или другие ИФА, необходимо поинтересоваться, на каком оборудовании будет проводиться анализ. При появлении каких-либо вопросов, лучше обратиться к врачу. Качество выполненного исследования полностью определяет тактику проведения дальнейшей диагностики.

Методика проведения анализа на гепатит С

Иммуноферментный анализ на гепатит С относят к серологическим методам исследования.

Тест-системы, при помощи которых выполняется ИФА, делят на несколько групп в зависимости от применяемых типов антител:

• лизатные, в ходе исследования применяют нативные АТ, полученные из культуры;
• рекомбинантные, используют синтезированные при помощи генной инженерии белковые структуры, аналогичные по строению с исследуемым антигеном;
• пептидные, применяют искусственно синтезированные пептиды.

В качестве твердой фазы обычно используют 96-луночные планшеты, реже – полистироловые шарики. Катализируют ИФА ряд специфических биологически активных ферментов.

Проведение иммуноферментного анализа проводится в несколько этапов:

1. Происходит распознавание исследуемого образца антителом. Результат определяют по количеству образовавшихся иммунных комплексов или остаткам свободных мест специфического связывания.
2. Формирование меченного ферментами соединения.
3. Трансформация ферментной метки в определенный сигнал, который регистрируется при помощи какого-либо физико-химического метода (спектрофотометрия, флуориметрия, люминесценция и т.д.).

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Существуют такие типы иммуноферментного анализа, выполняемого для диагностики вирусного гепатита С:

• «сэндвич»-метод;
• непрямой ИФА;
• конкурентный метод ИФА;
• ингибирующий ИФА;
• прямой ИФА.

Предварительно пациенту необходимо взять направление от врача. В частной лаборатории сдать анализ можно и без соответствующих документов. Непосредственно перед исследованием медсестра регистрирует данные больного и соответствующим образом маркирует пробирки.

Забор крови осуществляется из вены. Предварительно кожу обрабатывают стерильной салфеткой с дезинфицирующим раствором. После процедуры рану заклеивают одноразовым пластырем. Сроки постановки иммуноферментной реакции составляют от 1 до 5 дней. Результат можно забрать либо непосредственно в лаборатории, либо получить в электронном виде на почту или по коду на сайте.

Показания для ИФА

Обратиться к врачу, а впоследствии и сдать кровь на суммарные антитела к гепатиту С необходимо при возникновении специфических признаков инфекции.

Заподозрить патологию можно по следующим симптомам:

• почти не проходящее чувство усталости;
• нарушения сна (обычно в ночное время суток человек мучается от бессонницы, а в дневное – от сонливости);
• снижение концентрации внимания, замедление остроты умственной деятельности;
• снижение аппетита;
• неприятное чувство распирания, тяжести и дискомфорта в правом подреберье;
• нарушения пищеварения, сопровождающиеся метеоризмом, расстройствами стула, изжогой, отрыжкой, неприятным привкусом во рту;
• желтизна (часто, незначительная и быстро проходящая) кожного покрова, белков глаз.

Но более чем у половины инфицированных вирусная инфекция протекает без выраженной клинической картины, а возникающие признаки легко спутать с ОРВИ или банальным переутомлением. Именно поэтому гепатит С часто выявляют непреднамеренно в ходе подготовки к диспансеризации.

Строгими показаниями к сдаче крови для анализа служат:

• характерные для нарушения функции печени симптомы;
• общее недомогание;
• отклонения от нормы при расшифровке результатов печеночных проб;
• контакт с человеком, у которого подтвержден диагноз гепатита С (половой акт, соприкосновение с кровью или слизистыми и т.д.);
• наличие ВИЧ;
• гемотрансфузия или пересадка органов, выполненная до 1992 года;
• регулярное прохождение процедуры гемодиализа;
• заболевания, требующие частых инвазивных медицинских манипуляций;
• у детей, рожденных от инфицированных HCV матерей;
• оформление медицинской книжки для военнослужащих, работников в сфере торговли, здравоохранения, образования, косметологии, фармации.

Обязательным является проведение ИФА при беременности. Исследование выполняют на 12 и 30 неделе.

Не стоит забывать о таком понятии, как «серологическое окно». Под этим термином подразумевает срок, прошедший с момента инфицирования до времени, когда выявляется вирус, а точнее – вырабатываемые к его антигенам антитела.

Повторное проведение ИФА назначают при:

• неопределенных результатах первого анализа;
• прохождении противовирусной терапии (для контроля титра антител);
• Anti-HCV Total отрицательном, но сохранении симптомов вирусного гепатита.

По мнению специалистов, риску заражения подвергается практически каждый посетитель стоматологического или косметологического кабинета. Поэтому с целью профилактики Анти ВГС Тотал (определение суммарных антител методом ИФА) рекомендуют сдавать ежегодно.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Как подготовиться

Достоверность полученных результатов анализа во многом зависит от правильной подготовки пациента. Рекомендации специалистов включают:

• не есть за 12–14 часов до сдачи крови;
• за 3–4 часа до анализа отказаться от курения;
• сдают кровь в первой половине дня;
• после пробуждения нельзя ничего пить кроме негазированной воды;
• за 3–4 дня до исследования исключить жирную пищу, жареные блюда, приготовленные с большим количеством масла, «тяжелые» соусы (майонез, тартар и т.д., особенно покупные), фастфуд (включая снеки и закуски), колбасные изделия, копчености, сушеную, вяленую рыбу и/или мясо, в целом меню перед анализом должно составляться по диете №5;
• за 7–10 дней до ИФА категорически противопоказаны спиртные напитки (вне зависимости от крепости).

В целом перед сдачей крови необходимо придерживаться принципов рационального правильного питания, по возможности отказаться от вредных привычек.

При обращении к врачу с результатами анализа необходимо сообщить обо всех принимаемых медикаментах, возможных нарушений правил подготовки к исследованию, сопутствующих заболеваниях. Также следует рассказать о беспокоящих симптомах, даже если, на первый взгляд, они не имеют отношения к поражению печени.

Расшифровка полученных результатов

Расшифровка Anti HCV должна проводиться профильным специалистом (инфекционистом или гепатологом). В норме антител к гепатиту С в организме человека не должно быть.

Однако ложноотрицательный результат возможен при:

• периоде «серологического окна»;
• сопутствующем иммунодефиците (при вирусном поражении иммунитета выработка АТ прекращается);
• онкологических поражениях системы кроветворения.

Ложноположительный результат ИФА HCV AgAt иногда отмечают при:

• беременности (из-за выработки специфических белковых соединений, схожих по структуре с иммуноглобулинами);
• аутоиммунных патологиях (при таких заболеваниях продукция антител носит непредсказуемый характер);
• нарушениях системы кроветворения;
• выздоровлении после фазы острого гепатита С (у некоторых людей вирус уничтожается иммунной системой без медикаментозной терапии);
• предшествующей противовирусной терапии (иммуноглобулины могут сохраняться до 3–5 лет и более);
• у ребенка до 3 лет при рождении после беременности у инфицированной или прошедшей лечение матери;
• сопутствующих тяжелых инфекциях (вне зависимости от их этиологии), в таком случае ошибочные результаты возможны из-за массивного выброса антител в ответ на вирусное или бактериальное поражение тканей.

Отрицательный означает, что человек здоров. Но подтверждающими анализами для исключения инфекции служит ПЦР (качественное определение РНК вируса) или повторное ИФА через 4–8 недель.

ИФА Core-Ag Положительный результат свидетельствует о недавнем инфицировании Anti-HCV IgM Позитивный тест возможен при остром гепатите С. Если одновременно выявлены IgG вероятно обострение хронически протекающего вирусного процесса IgG (к различным структурным белкам) Обнаружение говорит в пользу хронического HCV

При обнаружении иммуноглобулинов в бланке с результатами анализов в обязательном порядке указывается их титр (концентрация). Таким образом врач может судить об интенсивности патологического процесса и оценить иммунный ответ. Но точную информацию о количественном содержании вируса в организме человека может дать только выявление РНК методом полимеразной цепной реакции.

Практически при каждом обращении в больницу, а тем более перед стационарным лечением или оперативным вмешательством нам предлагают сдать ВГС-анализ. Что это такое для человека, далекого от медицины, не совсем понятно. Однако отказываться от такого предложения точно не стоит.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Анализ Анти-ВГС

Основной целью вируса является печень. По кровеносным сосудам ген добирается до места назначения. В печени вирус начинает свое действие, проникая внутрь клеток печени и заставляя их работать на себя. В результате длительного отсутствия диагностики и лечения клетки печени разрушаются, что при водит к печальным последствиям.

1. Первыми в ответ на возникновение вируса начинают вырабатываться антитела класса М. Наибольшей концентрации они достигают в первые дни после заражения;
2. Далее в действие вступают IgG и начинают активно бороться с вирусом до полного его подавления;
3. Реакция антител класса А также показательна, так как их количество повышается при возникновении угрозы слизистым оболочкам организма.

Суть анализа заключается в следующем:

• Из взятой крови у пациента выделяют сыворотку;
• В заранее подготовленный стерильный планшет с углублениями вносят очищенные клетки патогена;
• Добавляют к клеткам сыворотку крови и наблюдают.

В случае если наблюдается реакция присоединения антител из исследуемой крови к клеткам гепатита С, они окрашиваются благодаря специальному веществу и дают возможность сделать выводы.

Результат такого анализа может однозначно сказать вам есть или нет в вашей крови антитела определенного типа. Он позволит выявить количество этих антител для понимания стадии течения болезни.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Самостоятельное определение ВГС

В первую очередь о неполадках в организме сообщит вам он сам. Основными внешними признаками инфицирования являются:

1. Желтизна кожного покрова;
2. Вялость;
3. Тошнота и рвота.

Кроме того, в аптеках продаются экспресс-тесты, которые отпускаются без рецепта врача:

• Существуют тесты, в которых в качестве биологического материала используется слюна, которая наносится на специальную полоску – индикатор. Однако вероятность ошибки такого теста крайне высока. При его применении нужно за полчаса ничего не есть и не пить, и не пользоваться никакими гигиеническими средствами для полости рта;
• Тесты, основанные на заборе крови снабжены специальными иглами и пипетками. Далее собранную кровь нужно капнуть на кассету, при необходимости добавить растворитель и подождать некоторое время.

Результат такого исследования, как правило, определяется по количеству полосок на индикаторе. В случае если спустя некоторое время на индикаторе появилась одна полоска – тест отрицательный, если две – положительный, если полосок нет – тест сделан неправильно.

Как это связано с гепатитом С?

Особенностью таких патогенных клеток являются их высокая склонность к мутациям. Медициной определено 6 основных генотипов вируса, однако в конкретном организме или конкретных условиях вирус способен мутировать настолько, что насчитывается около 45 различных подвидов каждого штамма.

Именно из-за способности к мутациям часто возникают хронические заболевания гепатитом. Организм не успевает блокировать патогенные клетки, пока антитела борются с одним подвидом вируса, он уже мутирует и превращается в иной.

Из-за распространения гепатита С и сложности его лечения анализ ВГС стал очень распространен среди населения. Его делают:

• Перед госпитализацией в стационар;
• При планировании или во время беременности;
• Медицинские работники и учителя ежегодно проходят диспансеризацию и сдают это анализ;
• Регулярный медосмотр предполагает сдачу такого анализа;
• Каждый желающий может самостоятельно обратиться в стационар для сдачи анализа. Это следует сделать, если вы часто меняете половых партнеров, страдаете наркоманией и просто в целях профилактики, так как заражение может произойти даже в косметологическом кабинете.

Таким образом, анализ ВГС очень распространен в наше время и позволяет избежать эпидемии этого вируса.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Вирус гепатиа С – не приговор

Вирус гепатита С – самый опасный среди вирусов гепатита, хотя и не самым распространенным. Все чаще медики не могут определить источник заражения. Это говорит о том, что опасны не только незащищенные половые контакты или взаимодействие с кровью зараженного человека, но и другие контакты, например, через слюну или пот.

Несмотря на всю сложность борьбы с вирусом, излечение возможно. Лечащим врачом является специалист – гепатолог. Основной задачей медиков становится недопущение развития необратимых патологий печени.

При быстром выявлении болезни назначается сложная схема медикаментозного лечения. Пациент при этом должен неукоснительно соблюдать рекомендации врача и наладить рацион питания, исключив соленые продукты и алкоголь.

Лечение будет длительным и сложным из-за применения препаратов со многими побочными эффектами. Однако в случае излечения и регулярного отрицательного анализа ВГС на протяжении пяти лет, вирус можно считать побежденным.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

ВГС положительно: что это?

Положительный результат Анти-ВГС не является окончательным и требует дополнительного более расширенного исследования крови.

1. При обнаружении IgM можно судить о недавнем инфицировании и активном развитии патогенных клеток;
2. При повышении IgG имеет место хронический гепатит С.

Этот анализ является предварительным и не отражает полной картины. Он указывает на присутствие либо отсутствие антител, но не дает представления о наличии самого вируса.

В случае положительного результата расширенного анализа необходимо немедленно приступать к лечению.

Как правило, для определения степени тяжести болезни делают биопсию печени, определяют штамм вируса и предлагают варианты излечения: от медикаментозного до трансплантации печени в зависимости от тяжести поражения.

Таким образом, одним из способов определить наличие вируса гепатита С является ВГС анализ. Что это самый быстрый, легкий и наиболее точный метод определения наличия патологии вы теперь знаете, а предупрежден – значит вооружен.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Тест на определение антител к возбудителю гепатита С в настоящее время используется в качестве «золотого стандарта» первичной диагностики заболевания. Исследование получило название анти-HCV. Методика выполнения теста позволяет определить титр иммуноглобулинов, что определяет активность иммунного ответа.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Некоторые разновидности анализа способны дифференцировать различные типы антител, что является определяющим фактором в постановке диагноза острого или хронического гепатита С. При наличии показаний возможно выявление иммуноглобулинов к специфическим структурным протеинам патогена. Такое исследование проводят редко, но оно помогает определить причину резистентности к терапии и оценить возможность развития осложнений.

Что значит Анти-HCV?

Анализ крови анти-HCV предназначен для обследования человека на предмет гепатита С. Что это за тест? Принцип исследования состоит в выявлении антител (иммуноглобулинов или АТ). Иммуноглобулины – специфические вещества протеиновой структуры, которые вырабатываются для защиты организма от бактерий и вирусов. Антитела способны «распознать» частицы болезнетворных патогенов, которые могут нанести необратимый урон здоровью.

Такие частицы именуют антигенами. Задача АТ – уничтожить их до наступления необратимых изменений. Иммуноглобулины отличаются высокой специфичностью. Иными словами, к каждому антигену вырабатываются определенные, уникальные по структуре антитела. Соответственно, если в организме обнаружены АТ к гепатиту С, то это свидетельствует о произошедшем инфицировании.

Пациенты часто спрашивают, если анализ анти-HCV положительный, что это значит? Зачастую такие результаты говорят о заражении. Но при проведении скрининга на иммуноглобулины возможно получение ложных (как позитивных, так и негативных) анализов. Дело в том, что результаты исследования Anti-HCV зависят от особенностей работы иммунной системы. К примеру, беременность и аутоиммунные заболевания могут продемонстрировать ложные маркеры теста.

Когда пациенты интересуются, что это за анализ, доктора разъясняют, что существует несколько разновидностей исследования. Типы тестов для выявления антител описаны в таблице.

Достоверность

Практически все современные клинические лаборатории сейчас перешли на тест-системы последнего поколения. Их точность и специфичность превышает 98%. Поэтому возможные сомнительные результаты обычно связаны не с человеческим фактором либо качеством используемого для диагностики набора реактивов, а с особенностями работы иммунной системы больного.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Именно из-за этого положительный анализ на гепатит С иммуноферментным методом (ИФА) не служит основанием для постановки диагноза. Результат ИФА требует обязательного подтверждения более специфичным тестом на наличие РНК патогена в крови, выполняемого способом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Точность последнего также приближается к 100%.

Сравнительно недавно в продаже в аптеках появились экспресс-тесты, направленные на выявление антител и позволяющие провести анализ HCV самостоятельно дома. Их преимуществом служит возможность выполнения без медицинской помощи. Подобный набор не заменит полноценного лабораторного анализа, но поможет провести самодиагностику и вовремя обратиться к врачу. Точность экспресс-тестов составляет порядка 95%. Но для минимизации риска неправильных результатов нужно соблюдать все правила выполнения анализа. Подробная инструкция по использованию тест-системы прилагается к набору. Существуют экспресс-тесты для выявления антител как в крови, так и в слюне.

Как проводят анализ на гепатит С

Серологический анализ на гепатит С выполняется с использованием одной из следующих методик:

• ELISA (от английской аббревиатуры «enzyme linked immunoadsorbent assay), исследование проводят при помощи реагентов-адсорбентов, которые обладают специфической способностью связывать иммуноглобулины в биологическом образце;
• EIA (enzyme immunoassay), результаты теста основаны на биохимической реакции антител с содержащимися в реактивах специфическими ферментами.

Существуют и другие методики выполнения анализа ИФА анти-HCV (например, EMIT), но они используются гораздо реже. ELISA и EIA просты в применении, доступны в финансовом плане, подходят для работы с большим количеством образцов. Во время исследования находящиеся в крови антитела образуют соединения со специфическими реагентами. Впоследствии они обнаруживаются либо при микроскопическом исследовании, либо при обработке образца при помощи специальных компьютерных программ. Таким образом возможен двойной контроль результатов исследования.

В качестве реактивов могут использоваться различные соединения:

• лизатные, полученные путем очищения патогена (для этой цели обычно применяют ультразвук);
• рекомбинантные, когда реагенты получают генно-инженерным путем;
• пептидные с применением искусственно полученных веществ.

В зависимости от используемого реагента тест-системы могут определять либо суммарные антитела, либо дифференцировать иммуноглобулины на G и М. В качестве твердой фазы применяют луночные планшеты либо шарики, лидируют в производстве таких устройств корпорации Roche или Abbot.

Показания для исследования ИФА

Тестирование на HCV (Hepatitis C Virus) проводится как в качестве рутинного исследования для регулярного обследования работников некоторых сфер (образования, здравоохранения), при планировании зачатия и т.д. Также анализ ИФА Тотал на суммарные антитела к гепатиту С выполняется и при подозрении на вирусное поражение печени.

ИФА является основным первичным методом диагностики заболевания. Остальные тесты проводятся по результатам этого исследования.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Проведение ИФА строго показано в следующих случаях:

• перенесенные до 1992 года гемотрансфузионные процедуры и хирургические вмешательства по поводу трансплантации органов (до этого времени не были известны методы выявления HCV у доноров и в биологическом материале);
• пристрастие к внутривенным наркотикам: применение психоактивных веществ ослабляют иммунную систему и делают организм более восприимчивым к подобного рода заболеваниям;
• использование общих с инфицированным человеком предметов гигиены;
• половые контакты с больным (особенно, гомосексуальные);
• инфицирование ВИЧ;
• при беременности;
• повышение уровня печеночных ферментов;
• любые иммунодефицитные состояния;
• работа с сфере здравоохранения.

Людям из группы риска рекомендуют регулярно сдавать кровь на HBsAg, HCV и HIV (гепатиты В и С, ВИЧ ).

Также исследование показано и при появлении определенных клинических признаков, которые могут косвенно указывать на наличие поражения печени вирусной этиологии. Это:

• постоянное чувство слабости;
• головные боли;
• сонливость;
• расстройства пищеварения (тошнота, изжога, диспепсия, диарея либо запор, неприятный привкус во рту);
• желтуха;
• потемнение урины;
• осветление кала.

Относительными показаниями к проведению иммуноферментного теста на ВГС служат:

• нанесение татуировок, перманентного макияжа, выполнение пирсинга;
• ведение беспорядочной половой жизни;
• проведение частых лечебных процедур (гемодиализа, эндоскопии);
• планирование беременности (тестирование проходят оба партнера);
• регулярные посещения маникюрных кабинетов.

В некоторых структурах результаты ИФА требуют при приеме на работу и далее ежегодно. С этой целью оформляется медицинская книжка, куда вносится не только тест на гепатит С, но и другие обследования и рекомендации врача.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

Как правило, это касается:

• работников здравоохранения, которые непосредственно контактируют с пациентами или донорским материалом;
• продавцов;
• поваров, официантов и других служащих сферы общественного питания;
• учителей, воспитателей в детских садах и другого персонала школ, интернатов, дошкольных детских учреждений, образовательных и развлекательных центров;
• косметологов и парикмахеров;
• мастеров в тату- и пирсинг-салонах.

В целом, риску заразиться гепатитом С подвергается почти каждый человек. Сейчас для выполнения теста вовсе не обязательно обращаться к врачу, брать направления и тратить несколько часов на ожидание в очереди. Анализ проводится практически в каждой частной лаборатории, а цена его вполне доступна. Забор крови занимает несколько минут, а результат выдают на руки либо присылают по указанному в бланке электронному адресу в течение 1–3 дней.

Правила подготовки к лабораторному тесту

Иммуноферментное исследование для выявления гепатита С зависит не только от качества используемых тест-систем и профессионализма лаборанта, проводящего анализ. На результаты также влияет и особенности подготовки к забору крови. В первую очередь это касается пациентов, страдающих от хронических заболеваний и вынужденных принимать медикаменты.

Таким больным следует:

• за 7–10 дней до предполагаемого обследования предупредить врача о необходимости сдачи анализов и возможности сделать перерыв в приеме лекарств;
• если прием медикаментов не требует соблюдения временного режима, пить препараты (делать укол) следует после забора крови;
• некоторые средства обладают иммуносупрессивной активностью (лекарства, назначаемые для терапии онкологических заболеваний, цитостатики, иммунобиологические медикаменты);
• длительный прием антибиотиков, противомикробных, противопаразитарных средств и некоторых других препаратов может негативно отразиться на состоянии печени, поэтому о курсе такого лечения следует известить доктора.

На консультации перед сдачей крови либо при обращении к врачу по поводу расшифровки анализа необходимо обязательно сообщить о любых проблемах со здоровьем, а тем более, об известных диагнозах и принимаемых лекарствах.

Чтобы снизить вероятность сомнительных, неопределенных результатов доктор и консультанты в клинической лаборатории неоднократно предупреждают о необходимости соблюдать определенные правила.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

К числу обязательных врачебных рекомендаций относят:

1. Специальную диету – за 3 дня до обследования. Питание по столу №5 рекомендовано при подтвержденном поражении печени вирусного либо другого генеза. Но на этапе подготовки к проведению исследования также нужно придерживаться диеты. Не следует есть жирные сорта птицы, мяса и рыбы, молока и кисломолочных продуктов, некоторые сыры, мясные субпродукты, соусы, колбаса, ветчина, сосиски, консервы. Рекомендуют ограничить употребление соли, противопоказаны маринованные овощи и фрукты, жареные блюда, фаст-фуд, сдоба.
2. Полное исключение алкоголя вне зависимости от объема и крепости напитков. Такое правило соблюдают как минимум 2 недели до забора крови.
3. Воздержание от приема пищи (разрешена только негазированная вода) за 12 часов до посещения лаборатории.
4. Не курить 8–10 часов до сдачи крови.
5. Посещение лаборатории утром после пробуждения.
6. За сутки до исследования ограничить тяжелые физические нагрузки.

Исследование лучше перенести, если:

• развилась бактериальная инфекция (вне зависимости от этиологии, например, ангина, пневмония, пиелонефрит);
• возникла необходимость в приеме антибиотиков, противоглистных средств, фунгицидных препаратов (анализ лучше выполнять через 7–10 дней после окончания курса терапии).

Симптомы ОРЗ и других заболеваний следует дифференцировать от признаков гепатита С. Зачастую вирусное поражение печени дает о себе знать гриппоподобной симптоматикой.

При нарушении правил подготовки к проведению исследования, лучше перенести анализ. Если же это по каким-либо причинам сделать невозможно, нужно известить доктора. Иногда подобные обстоятельства могут стать причиной получения ложноположительных либо ложноотрицательных результатов.

Расшифровка результатов анализа крови

Идеально, если расшифровка Anti-HCV проводится профильным специалистом. Но при сдаче анализа в частной лаборатории пациент получает результаты лечения еще до посещения врача. Редкий человек сможет дождаться консультации доктора и не поинтересоваться, выходят ли показатели за пределы физиологически допустимых значений.

Картинка с сайта: panaceya-medclinic.com

В норме Anti-HCV Total отрицательный, это значит, что антител к возбудителю гепатита С в крови человека не обнаружено.

Основные принципы интерпретации различных вариантов результатов серологического исследования приведены в таблице. Также указана цель выполняемого теста.

Как и любое другое исследование, ИФА на антитела к HCV сопряжены с риском получения ошибочных результатов.

Помимо технической ошибки в проведении анализа, ложные позитивные либо негативные данные возможны при:

• беременности;
• аутоиммунных заболеваниях (особенно, аутоиммунном гепатите);
• лейкемии и других видах онкологии;
• ВИЧ;
• ранее перенесенном гепатите С (как после противовирусной терапии, так и при самостоятельном выздоровлении, которое отмечают в 10–15% случаев инфицирования);
• тяжелых системных инфекциях, когда в кровь происходит постоянный выброс большого количества антител, что и является причиной погрешности в анализе;
• любых состояниях, связанных с серьезным иммунодефицитом (включая медикаментозный).

Еще одной причиной ложного результата является так называемое «диагностическое окно». Это период с момента инфицирования до накопления в крови человека антител в количестве, необходимом для лабораторной диагностики. Сроки, когда выявляется HCV методом ИФА, индивидуальны, но в среднем составляют 6–8 недель.

Проведение серологического исследования нецелесообразно для диагностики патологии у ребенка, рожденного от больной матери. Если вероятность внутриутробной и интранатальной передачи вируса не превышает 5–7% (исключение составляют женщины с ВИЧ, у них риск составляет порядка 20–25%), то IgG проходят через плаценту и обнаруживаются в крови ребенка. Поэтому в данном случае исследование на HCV всегда проводят при помощи ПЦР.

Учитывая возможность получения ложных результатов, доктора всегда назначают подтверждающий тест по методике качественной ПЦР.

ИФА остается главным рекомендуемым методом быстрой диагностики гепатита С. Данный тест проводится повсеместно. Но во избежание ошибок с результатами анализа лучше обратиться к врачу за более комплексным обследованием (особенно при негативном ИФА на фоне ухудшающегося самочувствия).

DOI: https://doi.Org/10.22263/2312-4156.2023.6.60

Лабораторная диагностика вирусного гепатита С на современном этапе В.Г. Попов1’2, Ю.Ю. Винник12, А.А. Петров1, А.В. Шульмин3

красноярский краевой кожно-венерологический диспансер №1, г. Красноярск, Российская Федерация красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого, г. Красноярск, Российская Федерация

3Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет, г. Витебск, Республика Беларусь

Вестник ВГМУ. — 2023. — Том 22, №6. — С. 60-68.

Laboratory diagnosis of viral hepatitis C in the current period V.G. Popov1’2, Y.Y. Vinnik1’2, A.A. Petrov1, A.V. Shulmin3

Krasnoyarsk Regional Dermatovenerology Dispensary No. 1, Krasnoyarsk, Russian Federation Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. V.F. Voino-Yasenetsky, Krasnoyarsk, Russian Federation

3Vitebsk State Order of Peoples’ Friendship Medical University, Vitebsk, Republic of Belarus Vestnik VGMU. 2023;22(6):60-68.

Резюме.

Особенности лабораторной диагностики вирусного гепатита С (ВГС) вызывают трудности у врачей-лаборантов и клиницистов, что обусловлено высокой распространённостью стертых и бессимптомных форм. Несвоевременное установление диагноза приводит к развитию тяжелых осложнений: циррозу печени и гепатоцеллюлярной карциноме. В статье описано исследование сывороток крови пациентов КГБУЗ «КККВД №1» ВГС методом ИФА различными тест-системами, после чего образцы, давшие положительный и сомнительный результаты, повторно исследовались этими же тест-системами. Образцы, давшие дважды положительный результат, были отобраны для проведения подтверждающих ИФА-тестов, после чего использовалась ИФА тест-система для подтверждения наличия антител к ВГС путем выявления спектра антител к каждому из антигенов. Согласно результатам исследования при получении положительных и слабоположительных результатов скрининга необходимо использовать подтверждающие тест-системы; при получении неопределенных результатов стоит прибегать к уточняющим методам диагностики (ПЦР, иммунноблот). Также установлены референсные значения для результатов, полученных методом скрининга.

Ключевые слова: диагностика, вирусный гепатит С, иммуноферментный анализ, антитела, подтверждающие тесты, референсные значения.

Abstract.

The peculiarities of laboratory diagnosis of viral hepatitis C (VHC) give rise to difficulties for laboratory doctors and clinicians, which is driven by high prevalence of erased and asymptomatic forms. Untimely diagnosis making leads to the development of severe complications: cirrhosis of the liver and hepatocellular carcinoma.

The article describes the research of blood sera of Krasnoyarsk Regional Dermatovenerology Dispensary No. 1 patients with VHC by means of ELISA test with different test systems, after which the samples that gave positive and questionable results were reinvestigated using the same test systems. The samples that twice gave positive results were selected for conducting confirmation ELISA tests after which ELISA test system was used to prove the presence of antibodies to VHC by revealing antibodies spectrum to each antigen.

According to the results of the investigation on receiving positive and weak positive screening results it is necessary to use confirmatory test systems; in case of indeterminate results it is recommended to resort to clarification diagnosing methods (PCR, immunoblot). Reference values have also been established for the results obtained by the screening method. Keywords: diagnosis, viral hepatitis C, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), antibodies, confirmatory tests, reference values.

Введение

По данным ВОЗ, вирусом гепатита С инфицировано около 180 млн. человек во всем мире, что составляет около 3% всего населения. 130 млн. являются хроническими носителями вируса, а 3-4 млн. заражаются вирусом гепатита С ежегодно. Примерно у 70-80% пациентов с острым вирусным гепатитом С развивается хроническая форма этого заболевания [1]. По данным Федеральной службы государственной статистики, общая заболеваемость острым вирусным гепатитом С постепенно снижается: согласно показателям на 30.11.2020 г., заболеваемость составила 1,0 на 100000 тысяч населения [2].

В соответствии с информацией, представленной Красноярским краевым медицинским информационно-аналитическим центром, среди взрослого населения за 2020 год наблюдается снижение заболеваемости, которая составила 10,9 на 1 тысячу населения [3].

Вирусные гепатиты занимают особое место среди всех хронических заболеваний. Это обусловлено распространенностью трудно диагностируемых стертых и бессимптомно протекающих форм, чаще дающих хронизацию процесса и осложняющихся циррозом печени (ЦП), а в ряде случаев — гепатоцеллюлярной карциномой (ГЦК) [4]. Вирусный гепатит С (ВГС), наряду с ВИЧ-инфекцией, туберкулезом, гепатитом В и рядом других инфекционных заболеваний, является глобальной медико-социальной проблемой. Возбудитель ВГС представляет собой небольшой, покрытый оболочкой вирус. Его геном представлен одноцепочечной РНК, которая кодирует 3 структурных и 5 неструктурных белков. К каждому из этих белков вырабатываются антитела, обнаруживаемые в крови больного [5].

Характерными особенностями инфекции являются циркуляция вируса в минимальных концентрациях и не имеющая прецедентов гетерогенность ВГС, которые становятся причиной слабой иммуногенности вируса, что не приводит к выработке полноценного протективного иммунитета. ВГС по сравнению с другими гепатитами имеет самую высокую степень хронизации и является основной причиной формирования всей группы хронических болезней печени [5].

Особенностью ВГС является малосимптом-ное течение, длительное время остающееся нераспознанным, но постепенно прогрессирующее с развитием ЦП. Увеличение продолжительности

жизни населения в большинстве цивилизованных стран мира, рост доли пожилых людей в структуре населения определяют повышение удельного веса возрастных патологий в структуре этой заболеваемости [5].

При тестировании сывороток пациентов с подозрением на ВГС недостаточно использовать скрининговые тест-системы, необходимо полное обследование образцов к разным белкам вируса. Полученные результаты позволят определить стадию заболевания, что важно для правильного выбора тактики лечения.

По данным клинических рекомендаций, скрининговые методы лабораторной диагностики хронического вирусного гепатита С основаны на выявлении апй-НСУ. Если обнаружены апй-НСУ, следует обязательно провести анализ на РНК ВГС. В случае, если анализ на РНК ВГС недоступен, допустимо провести тест на HCVcAg — этот антиген в сыворотке или плазме крови также является маркером репликации ВГС. В связи с тем, что метод ПЦР экономически дорогой и труднодоступный, для многих лабораторий вариант с определением HCVcAg остается наиболее предпочтительным. Распространенными тестами на HCVcAg являются лабораторные системы с использованием ИФА-метода.

Цель исследования — обосновать эффективность подтверждающих тестов для определения вирусного гепатита С методом ИФА после проведенного скринингового обследования, а также их достаточность при получении разных типов результатов при скрининге.

Задача исследования — установить референс-ные границы для получаемых скрининговым методом результатов.

Материал и методы

В исследовании мы использовали сыворотки пациентов краевого государственного бюджетного учреждения здравоохранения «Красноярский краевой кожно-венерологический диспансер №1» (КГБУЗ КККВД №1), направленных на исследование на ВГС; были использованы следующие тест-системы для иммуноферментного анализа (ИФА) на ВГС (скрининг): «ИФА-ВГС тест-система иммуноферментная для выявления и подтверждения наличия антител к вирусу гепатита С. Комплект №1/2» (ЗАО «ЭКОлаб», РФ), «МилаЛаб-ИФА-Анти-HCV тест-система имму-ноферментная для выявления антител к вирусу

гепатита С. Комплект №3» (ООО «НПО «Диагностические системы», РФ); тест-системы ИФА для подтверждения наличия ВГС: «ИФА-ВГС тест-система для выявления и подтверждения наличия антител к вирусу гепатита С. Комплект №2» и «Комплект №3» (ЗАО «ЭКОлаб», РФ).

Исследования проводились с помощью автоматического ИФА-анализатора «Lazurite» (Dynex Technologies, Inc. США).

После первичного качественного исследования методом ИФА 447 образцов тест-системой «МилаЛаб-ИФА-Анти-HCV» и 516 образцов — тест-системой «ИФА-ВГС. Комплект № 1/2» отбирались пробы, давшие положительный или сомнительный результат, которые исследовались повторно теми же тест-системами. Образцы, давшие дважды положительный результат, отбирались для исследования подтверждающими ИФА-тест-системами. Затем использовалась ИФА-тест-система для подтверждения наличия антител к ВГС путем выявления спектра антител к каждому из антигенов.

Результаты и обсуждение

На основании результатов скринингового метода «МилаЛаб-ИФА-Анти-HCV» было выявлено 72 положительных образца. Согласно инструкции производителя, оценка результатов исследования на наличие определяемых антител к вирусу гепатита С производилась следующим образом: оптическая плотность (ОП), измеряемая для каждого образца, сравнивалась с расчетной величиной ОП критической — средним значением суммы ОП отрицательного контроля (К-) и коэффициента, определяемого на предприятии-изготовителе. Таким образом, для дальнейшего исследования было отобрано 67 образцов, давших положительную реакцию.

Производитель предлагает оценивать результаты только как положительные или отрицательные; мы, в свою очередь, считаем, что ОП образца является информативным показателем в оценке полученного результата в работе клинициста. Поэтому нами был введен дополнительный критерий для оценки результата, который используется в диагностике других инфекций (например, при диагностике сифилиса методом ИФА). В данном исследовании мы оценивали результат как слабоположительный, если верхняя граница ОП была рассчитана по формуле: ОП , =ОП +ОП … Соответственно, при

слаб.положит крит. крит/2 ‘ г

оценке ОП 72 положительных образцов, 31 образец был отнесен к слабоположительным. Все слабоположительные и положительные образцы дополнительно исследовались: 30 проб — при помощи «ИФА-ВГС тест-система для выявления и подтверждения наличия антител к вирусу гепатит С. Комплект №2» ЗАО «ЭкоЛаб», РФ, 42 пробы

— при помощи «ИФА-ВГС» комплект №3» ЗАО «ЭкоЛаб», РФ.

Перед применением подтверждающего теста «ИФА-ВГС тест-система для выявления и подтверждения наличия антител к вирусу гепатит С. Комплект №2», ЗАО «ЭкоЛаб», РФ, исследуемые образцы сывороток крови были разделены на две группы: слабоположительные — с оптической плотностью (ОП) от 0,255 до 0,400 в количестве 30 (83,3%) и положительные — с ОП от 0,400 в количестве 5 (16,7%), ОПкрит 0,250.

При применении «ИФА-ВГС тест-система для выявления и подтверждения наличия антител к вирусу гепатит С. Комплект №2» определялись 6 рекомбинантных белков, сорбированных раздельно на поверхности лунок: соге-р, соге-п, ^3-р, Ш4-р, Ш4-п, Ш5-р.

Согласно интерпретации:

1. Если образец дал положительную реакцию только по какому-либо соге-антигену (пептидному или рекомбинантному), то его необходимо считать сомнительным.

2. Если образец дал положительную реакцию по пептидным е- и соге-антигенам, а также по ре-комбинантному соге-антигену, то его необходимо считать положительным.

3. Если образец дал положительную реакцию только по какому-либо NS-антигену, то его необходимо считать сомнительным.

4. Если образец дал положительную реакцию по разным NS-антигенам, то его необходимо считать положительным.

5. Если образец дал положительную реакцию только по какому-либо соге-антигену (пептидному или рекомбинантному), а также по одному из NS-антигенов, то его необходимо считать положительным.

В группе положительных образцов все реакции подтверждающего теста дали положительный результат. В 100% случаев выявлены антитела одновременно к соге-р и соге-п, в 40%

— выявлены антитела к №3-р и №4-р белкам.

На основании полученных данных подтверждающего теста образцы были разделены на следующие подгруппы (рис. 1):

Таблица 1 — Распределение положительных ответов подтверждающего антигенного теста при положительных результатах «ИФА-ВГС тест-система для выявления и подтверждения наличия антител к вирусу гепатит С. Комплект №2» ЗАО «ЭкоЛаб», РФ

Образцы Данные, кач. метод (ОП) соге-р соге-п ^3-р ^5-р Результат подтверждающего метода

Положитительный 1 1,555 + + — — — — Положитительный

Положитительный 2 1,850 + + — — — — Положитительный

Положитительный 3 1,943 + + + — — — Положитительный

Положитительный 4 2,045 + + + + — — Положитительный

Положитительный 5 2,100 + + + — + — Положитительный

Слабоположительный 1 0,257 — — + — — — Сомнительный

Слабоположительный 2 0,284 + — — — — — Сомнительный

Слабоположительный 3 0,300 + — + — — — Положитительный

Слабоположительный 4 0,278 — — — + — — Сомнительный

Слабоположительный 5 0,325 + — — + — — Положитительный

Слабоположительный 6 0,360 + — + + — — Положитительный

Слабоположительный 7 0,380 — + + — — — Положитительный

Слабоположительный 8 0,298 + — — — + — Положитительный

Слабоположительный 9 0,345 + — — + — — Положитительный

Слабоположительный 10 0,394 + + — — — — Положитительный

Слабоположительный 11 0,267 — — — + — — Сомнительный

Слабоположительный 12 0,288 + — + — — — Положитительный

Слабоположительный 13 0,335 + — — + — — Положитительный

Слабоположительный 14 0,311 + — + — — — Положитительный

Слабоположительный 15 0,280 + — — — — — Сомнительный

Слабоположительный 16 0,263 — — + — — — Сомнительный

Слабоположительный 17 0,375 + + — — + — Положитительный

Слабоположительный 18 0,261 — — — — + — Сомнительный

Слабоположительный 19 0,278 — — — + — — Сомнительный

Слабоположительный 20 0,295 + — + — — — Положитительный

Слабоположительный 21 0,348 + — + + — — Положитительный

Слабоположительный 22 0,394 — + — + — — Положитительный

Слабоположительный 23 0,364 + — + — + — Положитительный

Слабоположительный 24 0,386 + — + + — — Положитительный

Слабоположительный 25 0,328 + — — + — — Положитительный

Примечание: соге-п — синтетический пептид, содержащий антигенные детерминанты, кодируемые структурной областью генома ВГС; соге-р — рекомбинантный белок, кодируемый структурной областью ВГС; ^ — синтетический пептид и рекомбинантные белки, содержащие антигенные детерминанты, кодируемые неструктурной областью генома ВГС;

Подгруппа 1. Положительные образцы 1 и 2: выявлены соге-р, соге-п белки.

Подгруппа 2. Положительный образец 3: выявлены соге-р, соге-п, №3-р белки.

Подгруппа 3. Положительный образец 4: выявлены соге-р, соге-п, №3-р, №4-р белки.

Подгруппа 4. Положительный образец 5: выявлены соге-р, соге-п, №4-р белки.

У пациентов в подгруппах 1, 2 и 4 был установлен диагноз «хронический вирусный гепатит

С» (ХГС). У одного пациента в 3 группе был установлен диагноз ХГС, но в стадии обострения. Таким образом, даже при положительных результатах скринингового теста ВГС результаты подтверждающего теста могут нести дополнительную информативность, благодаря возможности определения наличия антител к группе NS-антигенов.

В группе образцов, охарактеризованных скрининговым тестом как слабоположительные,

на основании результатов подтверждающего теста 8 образцов были определены как сомнительные и 17 образов — как положительные.

При использовании «ИФА-ВГС тест-система для выявления и подтверждения наличия антител к вирусу гепатит С. Комплект №2» (ЗАО «Эко-Лаб», РФ) в слабоположительных образцах были выявлены антитела к следующим антигенам:

1. Только к Соге-р: 2 образца.

2. Только к №3-р: 1 образец.

3. Только к №4-р: 3 образца.

4. Только к №4-п: 2 образца.

У пациентов с антителами к соге-р антигену был установлен диагноз ХГС. В остальных случаях требовался дальнейший поиск РНК ВГС с целью уточнения диагноза (на момент проведения исследования у этих пациентов не был установлен точный диагноз).

При обследовании положительных образцов с использованием «ИФА-ВГС тест-система для

выявления и подтверждения наличия антител к вирусу гепатит С. Комплект №2» были выявлены антитела к следующим антигенам:

1. Положительные только по антигенам группы core: 3 образца.

2. Положительные по антигенам группы core и NS: 16 образцов.

3. Положительные по антигенам группы NS: не выявлено.

У всех пациентов с положительной реакцией в подтверждающем тесте установлен диагноз ХГС.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Кроме того, был проведен корреляционный анализ результатов скринингового и подтверждающего тестов (последний выполнялся с использованием другой тест-системы ЗАО «Эколаб»: тест-система иммуноферментная для выявления и подтверждния наличия антител к вирусу гепатита С «ИФА-ВГС» с 2 рекомбинантными белками: core, NS). В данное исследование были включены 42 положительных образца с ОП от 0,300

Рисунок 1 — Распределение антигенов подтверждающего теста при положительных результатах

Рисунок 2 — Распределение антигенов подтверждающего теста в случае получения сомнительных результатов

Рисунок 3 — Соотношение положительных реакций на антигены в подтверждающем тесте среди

слабоположительных образцов

до 3,500, ОПкрит для core: 0,155, для NS: 0,151 (табл. 2).

На основании ОП образцов, полученных при скрининговом обследовании, результаты разделены на 3 группы: слабоположительные (с ОП от 0,300 до 1,000), положительные (от 1,000 до 2,000), положительные (от 2,000 и выше).

Согласно правилам интерпретации результатов тест-системы иммуноферментной для выявления и подтверждения наличия антител к вирусу гепатита С» «ИФА-ВГС»:

1. Образец следует учитывать как отрицательный (не содержащий антител к ВГС), если у него нет положительной реакции для каждой группы антигенов.

2. Образец следует учитывать как положительный (содержащий антитела к ВГС), если у него имеется положительная реакция для каждой группы антигенов или только по группе структурных антигенов (core) ВГС.

3. Образец с положительной реакцией только по группе неструктурных антигенов (NS) ВГС считается неопределенным.

В результате исследования данных образцов в подтверждающем тесте по антигенам core и NS были получены следующие результаты в соответствующих группах:

1. Слабоположительные образцы: с реакцией по core и NS белкам (в количестве 6 образцов); один образец с реакцией только на core (с ОП 0,913); один образец (с ОП 0,670), описанный как неопределенный, с реакцией только на NS белок; один отрицательный образец с ОП 0,315 при отсутствии реакции на core и NS белки (рис. 4).

Таким образом, при использовании подтверждающего теста образцы, давшие слабопо-

ложительную реакцию при скрининге, в 66,6% случаев были подтверждены как положительные. Положительные образцы с ОП от 1,000 до 2,000 были подтверждены в половине случаев.

При исследовании положительных образцов с ОП от 2,000 и выше, все они были подтверждены как положительные, из них положительными по core и NS белкам было 29 образцов, положительными только по белкам core — 3 образца.

Во всех сомнительных случаях для постановки диагноза ВГС результатов серологических тестов (скринингового и подтверждающего) недостаточно — требуется проведение ПЦР-диагностики.

Заключение

1. При получении любых слабоположительных и положительных результатов скринингового теста необходимо проводить дополнительные исследования с помощью подтверждающих тест-систем на 2 или более специфических антигена (для более четкого выявления серотипов) как более экономически выгодный и доступный аналог ПЦР.

2. При работе с подтверждающими тестами нами были получены сомнительные (неопределенные) результаты. Следовательно, такие образцы нужно подтверждать не только подтверждающими ИФА-тестами, но и использовать дополнительные, более специфичные методы, такие как ПЦР-диагностика (сомнительные результаты по core), иммуноблотинг (сомнительные результаты по NS).

3. Только по результатам ИФА-тестов невозможно окончательно установить наличие ВГС-инфекции.

Таблица 2 — Распределение выявленных антигенов в образцах, положительных по core и NS

Образцы Данные, скрининговый Core NS Результат подтверждающего теста

метод (ОП)

Слабоположительный 1 0,766 + + положительный

Положительный 2 2,780 + + положительный

Положительный 3 2,700 + + положительный

Слабоположительный 4 0,670 — + неопределенный

Положительный 5 3,220 + + положительный

Слабоположительный 6 0,427 + + положительный

Положительный 7 3,005 + + положительный

Положительный 8 3,019 + + положительный

Положительный 9 3,064 + + положительный

Положительный 10 2,908 + + положительный

Положительный 11 1,167 + + положительный

Положительный 12 3,123 + + положительный

Положительный 13 1,253 — — отрицательный

Положительный 14 3,032 + + положительный

Слабоположительный 15 0,378 + + положительный

Положительный 16 2,845 + + положительный

Слабоположительный 17 0,315 — — отрицательный

Положительный 18 2,960 + + положительный

Положительный 19 2,494 + + положительный

Положительный 20 2,376 + + положительный

Положительный 21 2,316 + + положительный

Положительный 22 2,552 + + положительный

Положительный 23 2,682 + + положительный

Положительный 24 2,345 + + положительный

Положительный 25 2,308 + + положительный

Положительный 26 2,705 + + положительный

Положительный 27 2,155 + — положительный

Положительный 28 1,431 + + положительный

Положительный 29 2,672 + + положительный

Положительный 30 2,660 + + положительный

Положительный 31 2,813 + + положительный

Положительный 32 2,542 + + положительный

Положительный 3 3 2,418 + + положительный

Положительный 34 2,758 + + положительный

Положительный 3 5 2,741 + + положительный

Положительный 36 2,779 + + положительный

Положительный 37 1,093 — — отрицательный

Слабоположительный 38 0,913 + — положительный

Положительный 3 9 2,546 + + положительный

Положительный 40 2,383 + + положительный

Положительный 41 2,432 + — положительный

Положительный 42 2,511 + — положительный

Примечание: core — рекомбинантный белок, кодируемый структурной областью ВГС; NS — рекомбинантные белки (NS3, NS4, NS5), содержащие антигенные детерминанты, кодируемые неструктурной областью генома ВГС.

4. Не всегда подтверждающие тесты дают чувствительного и специфичного, поэтому под-положительные результаты, что приводит к необ- тверждающие тесты являются звеном диагности-ходимости использования метода ПЦР как более ческой цепочки, приводящим к удорожанию про-

Образны с ОП 0.300 до 1.000

ОоразцысОП от 1.000 до 2.000

Только NS (положит.); 16.60%

i опько core (положит.); 16,60%

Core + NS (Отр.)- 16.60%

Соге-ь NS (положит): 50.00%

J

Core и NS (отр ); 50.00%

Л

■ ■ } /

Core и NS (положит.); 50.00%

Рисунок 4 — Распределение реакций на антигены core и NS в подтверждающем тесте для группы слабоположительных образцов

Образцы с ОП от 2,000 и еышо

Рисунок 6 — Распределение реакций на антигены core и NS в подтверждающем тесте для второй группы положительных образцов

ведения исследований. В нашем исследовании при всех выявленных слабоположительных результатах (от 0,255 до 0,400 единиц ОП) скринингового обследования на вирусный гепатит С должен быть использован метод ПЦР, без необходимости применения подтверждающего ИФА-теста.

5. На сегодняшний день не описано рефе-ренсных границ между слабоположительным (неопределенным) и положительным результатами ИФА-тестов. Благодаря сформированным нами референсным границам результаты скри-нинговых исследований для дальнейшей диагностики могут направляться в централизованные лаборатории, что позволит сделать диагностику вирусного гепатита С более точной и доступной. Для получения более достоверной информации о референсных границах необходимо проводить дальнейшие расширенные исследования.

Рисунок 5 — Распределение реакций на антигены core и NS в подтверждающем тесте для первой группы положительных образцов

Литература

1. Борисовская, А. О. Анализ заболеваемости острым и хроническим вирусным гепатитом С за 2006-2017 гг. / А. О. Борисовская, Н. А. Заяц // Бюл. мед. Интернет-конф.

2020. Т. 10, № 1. С. 7.

2. Заболеваемость населения социально-значимыми болезнями [Электронный ресурс] / Федер. служба гос. статистики. Режим доступа: https://rosstat.gov.ru/search?q=% D0%97%D0%B0%D0%B1 %D0%BE%D0%BB%D0%B5 %D0%B2%D0%B0%D0%B5%D0%BC%D0%BE%D1% 81 %D 1 %82%D 1 %8C+%D0%BD%D0%B0%D 1 %81 %D 0%B5%D0%BB%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D1%8F+ %D 1 %81 %D0%BE%D 1 %86%D0%B8%D0%B0%D0% BB%D1%8C%D0%BD%D0%BE-%D0%B7%D0%BD% D0%B0%D 1 %8 7%D0 %B 8%D0%BC%D 1 %8B%D0%B C%D0%B8+%D0%B 1 %D0%BE%D0%BB%D0%B5% D0%B7%D0%BD%D1%8F%D0%BC%D0%B8&date_ from = &content=on&date_to=&search_ by=all&sort=relevance. Дата доступа: 18.01.2024.

3. Статистический сборник 2020 г [Электронный ресурс] / Краснояр. краевой мед. информ.-аналит. центр. Режим доступа: https://www.kmiac.ru/statistics/7ELEMENT_ ID=125. Дата доступа: 18.01.2024.

4. Притулина, Ю. Г. Журнал вестник новых медицинских технологий Гепатит С у пожилых людей / Ю. Г. Притулина, С. Е. Прокопенко // Вестн. новых мед. технологий.

2021. Т. 28, № 1. С. 22-25. doi: 10.24412/1609-2163

5. Алгоритм применения тестов для под- тверждения результатов скрининга антител к вирусу гепатита С / А. А. Потапова [и др.] // Новости «Вектор-Бест». 2017. № 1 (83). С. 8-11.

6. Вирусные гепатиты в Российской Федерации. Аналитический обзор. Вып. 11 / под ред. В. И. Покровского, А. А. Тотоляна. Санкт-Петербург : ФБУН НИИЭМ им. Пасте-ра, 2018. 112 с.

Поступила 02.06.2023 г.

Принята в печать 20.12.2023 г.

References

1. Borisovskaya AO, Zayats NA. Analysis of the incidence of acute and chronic viral hepatitis C for the years 2006-2017. Byul Med Internet-konf. 2020;10(1):7. (In Russ.)

2. Feder sluzhba gos statistiki. Incidence of socially significant diseases in the population. Available from: https://rosstatgov.ru/search?q=0/oD00/o97%D0%B0%D0 %B 1 %D 0%BE %D 0%BB %D 0%B5 %D0 %B 2%D0 %B

0 %D0%B 5 %D 0%BC %D0%BE%D 1%81 %D 1%82 %D

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

1 %8C+%D0%BD%D0%B0%D 1 %81 %D0%B5%D0% BB%D0%B5%D0%BD%D0%B8%D 1 %8F+%D 1%81 %D0%BE%D1%86%D0%B8%D0%B0%D0%BB%D1 %8C%D0%BD%D0%BE-%D0%B7%D0%BD%D0% B0%D1%87%D0%B8%D0%BC%D1%8B%D0%BC% D0%B8+%D0%B 1 %D 0%BE %D0 %BB %D 0%B5 %D 0%B7%D0%BD%D1%8F%D0%BC%D0%B8&date_ fr o m = & c o n t e n t = o n & d a t e to = &search

by=all&sort=relevance. [Accessed 18th January 2024]. (In Russ.)

3. Krasnoyar kraevoi med inform-analit tsentr. Statistical Compendium 2020. Available from: https://www.kmiac. ru/statistics/?ELEMENT_ID= 125. [Accessed 18th January 2024]. (In Russ.)

4. Pritulina YuG, Prokopenko SE. Hepatitis C in the Elderly. Vestn Novykh Med Tekhnologii. 2021;28(1):22-5. (In Russ.). doi: 10.24412/1609-2163

5. Potapova AA, Shulgina MM, Ermolaeva MI, Syuch NI. Algorithm for application of tests to confirm hepatitis C virus antibody screening results. Novosti Vektor-Best. 2017;(1(83)):8-11. (In Russ.)

6. Pokrovskiy VI, Totolyan AA, red. Viral hepatitis in the Russian Federation. Analytical review. Vol. 11. St. Petersburg, RF: FBUN NIIEM im Pastera; 2018. 112 p. (In Russ.)

Submitted 02.06.2023 Accepted 20.12.2023

Сведения об авторах:

В.Г. Попов — зав. клинико-серологической лабораторией, Красноярский краевой кожно-венерологический диспансер №1; преподаватель фармацевтического колледжа, Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого, https://orcid.org/0000-0002-4781-2028;

Ю.Ю. Винник — главный врач Красноярского краевого кожно-венерологического диспансера №1; д.м.н., профессор кафедры дерматовенерологии им. проф. В.И. Прохоренкова с курсом косметологии и ПО, Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого;

А.А. Петров — биолог клинико-серологической лаборатории, Красноярский краевой кожно-венерологический диспансер №1;

А.В. Шульмин — д.м.н., профессор, зав. кафедрой организации и экономики фармации, Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет, e-mail: [email protected] — Шульмин Андрей Владимирович.

Information about authors:

VG. Popov — head of the clinical serological laboratory, Krasnoyarsk Regional Clinical Dermatovenerology dispensary No. 1; teacher of the pharmaceutical college, Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. VF. Voino-Yasenetsky, https://orcid.org/0000-0002-4781-2028;

Y.Y. Vinnik — Doctor of Medical Sciences, chief physician of Krasnoyarsk Regional Dermatovenerology Dispensary No. 1; professor of the Chair of Dermatovenerology named after Prof. VI. Prokhorenkov with the course of cosmetology and PD; Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. VF. Voino-Yasenetsky;

A.A. Petrov — biologist of the clinical serological laboratory; Krasnoyarsk Regional Dermatovenerology Dispensary No.1;

A.V. Shulmin — Doctor of Medical Sciences, professor, head of the Chair of Organization and Economics of Pharmacy, Vitebsk State Order of Peoples’ Friendship Medical University, e-mail: [email protected] — Andrey V. Shulmin.

Анализ на антитела к HCV (специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С) – это обнаружение маркеров гепатита С (HCV), что применяется с целью этиологической расшифровки и диагностики вирусных заболеваний печени.

HCV передается только через инфицированную кровь. Заражение может произойти:

• если применять не обработанные должным образом инструменты в медицине, при проведении маникюра и педикюра, в тату-салонах;
• в случае использования чужих бритв, зубных щеток, ножниц;
• во время трансплантации органов, костного мозга, переливания крови;
• от матери ребенку в родах;
• при незащищенных близких отношениях.

В группу риска по возможному заражению попадают:

• младенцы, рожденные от инфицированных матерей;
• постоянно контактирующие с человеком, страдающим хроническим гепатитом С;
• все без исключений сотрудники медицинских учреждений;
• частые посетители косметических и тату-кабинетов, салонов красоты;
• пациенты планового гемодиализа и других методов экстракорпоральной (вне тела человека) детоксикации;
• люди, сдающие кровь (доноры) и страдающие такими болезнями, при которых часто проводят переливание крови или ее компонентов;
• часто меняющие интимных партнеров;
• лица нетрадиционной половой ориентации;
• наркоманы, использующие нестерильные шприцы;
• осужденные, находящиеся в заключении;
• страдающие ВИЧ-инфекцией.

В остром периоде болезнь часто протекает без желтухи и других симптомов воспаления печеночных клеток. Хронизация происходит по данным разных источников в 55–85 % случаев. Исходом хронического гепатита С является формирование цирроза или рака печени с быстро прогрессирующей печеночной недостаточностью.

В настоящее время болезнь успешно лечится, используются противовирусные средства прямого действия. Избавиться от вируса удается большинству пациентов, принимающих препараты.

Важно своевременно поставить диагноз. Первым скрининговым исследованием является анализ на anti-HCV total (специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С). То есть обнаружение суммарных общих антител без распределения по видам.

В случае положительного антиС анализа назначаются дополнительные обследования:

• по классам антител, иммуноглобулины М и G;
• иммунный блоттинг, позволяющий выявить антитела ко всем антигенам;
• РНК посредством ПЦР (полимеразной цепной реакции);
• выявление генотипа;
• биохимию с определением печеночных ферментов;
• фиброскан печени.

Что за анализ анти-HCV (специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С) и какая нужна подготовка.

Исследование делают в двух лабораториях: иммунологии и вирусологии. Материалом является сыворотка крови, взятая из вены в день проведения теста. Лабораторный метод теста – это ИФА (иммуноферментный анализ). Он основан на взаимодействии меченых антигенов и антител из исследуемого образца. При этом происходит изменение интенсивности окраски среды. Отклонения улавливают специальные приборы.

Чтобы минимизировать влияние посторонних факторов и оптимизировать результат, следует правильно подготовиться к сдаче крови.

Пациентам рекомендуется:

1. Не опаздывать, приходить в лабораторию до 11 часов утра в рабочие дни.
2. Сдавать кровь строго натощак, последний прием пищи должен быть не позднее 19 часов.
3. Накануне не употреблять жирные, копченые, мучные продукты.
4. За три дня исключить алкоголь, за несколько часов курение.
5. В течение предыдущего дня стараться не нервничать, ограничить физический труд и не посещать спортивные тренировки.
6. До забора крови не проводить никакие другие обследования и процедуры.
7. О приеме на постоянной основе препаратов обязательно сообщить врачу.
8. Женщинам сдавать кровь в середине цикла.

Что означает анализ anti-HCV (специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С)

Анализ на специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С определяет наличие или отсутствие у человека контакта с HCVag.

Отрицательное заключение, когда в бланке ответ “не обнаружено”, означает, что гепатита С в настоящее время и в анамнезе нет. Исключение составляет ситуация, когда кровь взята сразу после заражения. Если есть подозрение на возможность инфицирования, тест следует сделать снова через 90 и 180 суток после дня, когда могло произойти заражение.

Положительный результат: “обнаружено” бывает после перенесенной болезни и выздоровления или на фоне текущего воспаления печени острого или хронического характера.

Чтобы исключить ложноположительный результат и определить форму и стадию болезни, назначаются уточняющие обследования. Они позволяют охарактеризовать состояние печеночных клеток, выявить фиброз печеночной ткани, уточнить наличие возбудителя.

Анализ на специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С при наличии HCVAg покажет, что за стадия инфекции. В острой стадии и когда возбудитель реактивируется преобладают М, а при хронической инфекции и в случае полного выздоровления – G-антитела.

Показания

Анализ делают:

• перед проведением операции;
• если имеются симптомы поражения печени;
• когда повышены печеночные ферменты в биохимии крови;
• после возможного контакта с кровью больного этой инфекцией;
• во время беременности;
• в случае наличия зуда кожи, повышенной кровоточивости;
• донорам крови, органов, костного мозга;
• перед ЭКО;
• детям, у которых инфицирована мама.

Исследование назначают врачи разных специальностей:

• акушеры-гинекологи и хирурги;
• семейные врачи и гастроэнтерологи;
• инфекционисты и иммунологи.

Расшифровка

Здоровый человек получает бланк, в котором отображен отрицательный результат.

Положительный анализ на анти-HCV специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С бывает:

1. Если имеется текущий острый гепатит С, в начальной стадии инфекции за счет М-белков.
2. При хроническом, во время активации будут присутствовать и М, и G.
3. Когда хронический процесс протекает благоприятно, то регистрируются только G антитела. Наличие инфекционного процесса подтверждается другими маркерами, в первую очередь выявлением РНК вируса по ПЦР.
4. В случае выздоровления от болезни, когда хронизации не происходит, то в крови выявляются только G-иммуноглобулины, а все остальные маркеры отрицательные.

Защитные белки класса М начинают регистрироваться в крови после 6 недель от момента заражения. G появляются после трех месяцев от дня инфицирования и сохраняются пожизненно.

Интерпретация полученного ответа

Суждение о причинах положительного результата можно проводить только после получения данных дополнительных обследований. Совершенно верно только одно, что организм имел контакт с вирусом.

Отрицательный анализ, как правило, означает отсутствие вируса, редко – начало инкубационного периода.

Что влияет на результат

Ответ бывает некорректным, если не выполнены рекомендации по подготовке к исследованию. Ложноположительный анализ случается при наличии в плазме аутоантител, ревматоидного фактора, маркеров онкозаболевания. Ложноотрицательный, серонегативный вариант по данным исследователей регистрируется у 5 % обследуемых.

Выводы

Анализ анти-HCV является первым шагом в серологической дифференциальной диагностике инфекционных гепатитов, выявлении маркеров гепатита С. Обнаружение суммарных белков и отдельно М и G антител позволяют сделать вывод о стадии, периоде, форме инфекции.

С учетом возможности ложноположительных и ложноотрицательных результатов, для уточнения следует брать кровь на повторный анализ и определение других маркеров инфекции.

84912 просмотров