Висмут сульфит агар инструкция

Принцип метода — визуальное обнаружение сальмонелл, выросших на питательной среде при посеве исследуемых образцов.

Состав набора.

Набор реагентов Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут- сульфит агар) представляет собой смесь сухих компонентов из расчета г/л:

Панкреатический гидролизат кильки — 27,1

Агар микробиологический — 12,4±2,5

Экстракт кормовых дрожжей — 0,64

Д (+)-глюкоза — 4,5

Висмут лимоннокислый — 1,7

Натрия сульфит безводный — 2,55

Соль Мора — 1,15

Динатрий фосфат обезвоженный — 2,55

Бриллиантовый зеленый — 0,016

Сода кальцинированная — 0,6

Натрия хлорид — 2,5

Набор реагентов «Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут- сульфит агар)» выпускается в полиэтиленовых банках по 150, 200,250 г а также по 200 г в пакетах их трехслойной ламинированной бумаги с инструкцией по применению, паспорт (в комплекте поставки). Ремонту и обслуживанию не подлежит.

Чувствительность среды, скорость роста и стабильность основных биологических свойств микроорганизмов. «Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут-

сульфит агар)» должна обеспечивать рост тест-штаммов Salmonella typhi Н 901 ГДР/ГИСК, Salmonella typhimurium 79, Salmonella london 3496, Salmonella paratyphi A 225, Salmonella gallinarum 665 и Salmonella typhi «bismuth» на всех засеянных чашках Петри при посеве по ОД мл разбавленной стерильным 0,9 % раствором натрия хлорида в соотношении 1:1 микробной взвеси культуры каждого тест-штамма из разведения 10″⁶
не позднее 48 ч инкубации при температуре (37+1) °С. Тест-штаммы S. typhi Н 901 ГДР/ГИСК, S. typhimurium 19 и S. london 3496 образуют черные круглые диаметром 1,5-3,0 мм колонии с блестящей зоной вокруг них; среда под колониями окрашивается в черный цвет.

S. paratyphi А 225 образует зеленые круглые с темным центром колонии диаметром 1,0-2,5 мм; S. gallinarum 665 — зеленые круглые колонии диаметром 0,8-1,2 мм; S. typhi «bismuth» — полиморфные черные колонии диаметром 1,0-2,0 мм с окрашиванием среды под ними в черный цвет.

Дифференцирующие свойства среды. Питательная среда должна обеспечивать на всех засеянных чашках четкую дифференциацию по характеру роста тест-штамма S. typhimurium 19 от Е. coli 3912/41 (055:К59) при посеве по 0,1 мл микробной смеси указанных штаммов через 44-48 ч инкубации при температуре (37+1) °С.

Тест-штамм Е. coli 3912/41 (055:К59) образует зеленовато-коричневые колонии диаметром 0,5-1,5 мм без окрашивания среды в отличие от черных колоний S.typhimurium 79 с блестящей зоной вокруг них и окрашиванием среды под колониями в черный цвет.

Показатель ингибиции. Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (Висмут-сульфит агар) должна полностью подавлять на всех засеянных чашках рост тест- штамма Staphylococcus aureus Wood-46 при посеве по 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10′¹, Klebsiella rhino skier omatis NCTC 5046 из разведения 10″⁵ через 44-48 ч инкубации при температуре (37±1) °С. При посеве по 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10′⁶ тест-штамма Proteus vulgaris НХ 19 через 44-48 ч инкубации при температуре (37±1) °С на всех засеянных чашках должно быть подавлено роение (рост Р. vulgaris НХ 19 в виде зеленовато-коричневых колоний диаметром 2,5-3,5 мм). Рост тест- штамма Е. coli 3912/41 (055:К59) на среде должен подавляться не менее чем в 100 раз по отношению к числу колоний на питательном агаре при посеве по 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10″⁴*.

* Примечание: при отсутствии роста Е. coli 3912/41 (055:К59) из разведения 10″⁴
используют данные, полученные при посеве штамма из разведения 10″³.

ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для бактериологических исследований  Питательная среда для выделения сальмонелл сухая Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск

 НАЗНАЧЕНИЕ

Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск предназначен для бактериологических исследований в санитарной и клинической микробиологии с целью выделения сальмонелл из исследуемого материала.

1. характеристика

Висмут-сульфит-ГРМ агар представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный  порошок светло-желтого цвета, получаемый смешиванием сухих компонентов.

Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.

2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

Свежеприготовленная среда, благодаря  бриллиантовой зелени и висмуту лимоннокислому, входящих в состав среды, обладает сильным ингибирующим эффектом в отношении сопутствующей микрофлоры.

Дифференцирующее действие среды основано на том, что образуемый бактериями из сульфата железа сероводород, вызывает почернение индикатора – цитрата висмута – вследствие перехода его в сульфид висмута, вещество черного цвета. Поэтому бактерии, образующие сероводород, формируют черные или черные с коричневым или темно-зеленым оттенком колонии, обладающие часто металлическим блеском. Среда под колониями, при этом, окрашена в черный цвет.

2.2. СОСТАВ

Висмут-сульфит-ГРМ агар представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:

1. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Висмут-сульфит-ГРМ агар обеспечивает на всех засеянных чашках Петри рост тест-штаммов сальмонелл и их четкую  дифференциацию от кишечной палочки не позднее 48 ч инкубации при температуре (37±1) °С. На среде отсутствует рост стафилококков, некоторых клебсиелл,  подавляется роение протея и частично рост эшерихий.

1. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

При анализе исследуемого материала – соблюдение СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV группы патогенности и гельминтами».

1. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

• Термостат обеспечивающий температуру 37±1 °С
• Весы лабораторные 2 класса точности
• Автоклав
• Пробирки стеклянные
• Пипетки стеклянные позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
• Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
• Чашки Петри стерильные
• Вода дистиллированная
• Колбы
• Воронки стеклянные

1. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Объекты исследований в санитарной и клинической микробиологии.

1. Проведение АНАЛИЗа

7.1. Приготовление среды Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск.

Порошок в количестве, необходимом для приготовления конкретной серии, тщательно размешивают в 1 л воды дистиллированной, кипятят при постоянном перемешивании в течение 3 мин до полного расплавления агара. Охлаждают до температуры 45-50 °С, взбалтывают, разливают в нестерильные чашки Петри слоем 4-5 мм и оставляют на рабочем столе с открытыми крышками для застывания и подсушивания среды в течение 90-100 мин при температуре 18-25 °С. Готовая среда в чашках непрозрачная зелено-желтого цвета.

Готовую среду можно использовать в течение 3 суток при температуре хранения от 2 до 25 °С (хранить в защищенном от света месте).

7.2. Взятие, посев инфицированного материала и учет результатов производят в соответствии с «Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний, вызванных энтеробактериями» (М., 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 г., № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».

7.3. Исследуемый материал тонким слоем распределить шпателем по поверхности чашек Петри с Висмут-сульфит-ГРМ агаром (при необходимости сделать разведения). Инкубировать при температуре (37±1) °С в течение 24-48 ч.

1. РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Учет результатов проводят визуально через 24-48 ч инкубации при температуре
(37±1) °С. Сальмонеллы, продуцирующие сероводород, на Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск образуют круглые или полиморфные, черные или черные с коричневым или темно-зеленым оттенком колонии, обладающие часто металлическим блеском, и окрашиванием среды под колониями в черный цвет; сальмонеллы, не продуцирующие сероводород, образуют круглые зеленые или темно-зеленые колонии. Колонии эшерихий круглые, зеленовато-коричневые.

Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее, чем в трех повторностях.

1. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ

Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С.

Срок годности – 3 года. Среда с истекшим сроком годности использованию не подлежит.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

По вопросам, касающимся качества Висмут-сульфит-ГРМ агара в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279 Оболенск, Московская обл., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел. (4967) 36-00-20, факс 36-01-16.

Висмут-сульфит-ГРМ агар Оболенск

Питательная среда для выделения сальмонелл сухая Висмут–сульфит–ГРМ агар предназначена для бактериологических исследований в санитарной и клинической микробиологии с целью выделения сальмонелл из исследуемого материала. 

Представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок светло–желтого цвета.

Фасовка в полиэтиленовую банку по 250 г

Состав (г/л):

Панкреатический гидролизат рыбной муки – 24,0 г

Экстракт пекарных дрожжей – 1,0 г

Натрия хлорид – 2,0 г

Д–глюкоза – 4,5 г

Натрия гидрофосфат – 2,0 г

Натрия сульфит – 4,0 г

Висмут лимоннокислый – 1,7 г

Железо (II) сернокислое 7–водное – 0,6 г

Бриллиантовый зеленый – 0,01–0,015 г

Натрий углекислый – 0,4–0,7 г

Агар микробиологический –11,0 ± 3,0 г 

Хранить в герметично закрытой упаковке в сухом, защищённом от света месте при температуре 2–30 °С в течение всего срока годности – 3 года.

Условия доставки

Вариант 1: Курьером СДЭК до адреса

Вариант 2: Пункт выдачи СДЭК

Вариант 3: Пункт выдачи Boxberry

Вариант 4: Почта России

Вариант 5: Отправить транспортной компанией Деловые Линии