Краситель по романовскому инструкция

Назначение:

Раствор (р-р) Азур-эозина по Романовскому предназначен для окрашивания форменных 

элементов крови. 1 л красителя рассчитан на окрашивание 3-6 тыс. мазков крови 

при разведении красителя в 10-20 раз.

Состав:

1). 0,76% р-р Азур-эозина в смеси метанола и глицерина — 1 флакон (1 л)

2). Концентрированный раствор фосфатного буфера — 1 флакон (10 мл)

3. Приготовление рабочего раствора и окраска мазков крови.

Рекомендуется (Лилли Р. 1969) использовать рабочие красящие смеси с рН=6,4-6,8. 

Для приготовления рабочей красящей смеси 0,76% азур-эозин развести в 10-20 раз 

в свежей дистиллированной воде. Буфер следует вводить в воду до прибавления 

красителя из расчета 0,05-0,1 мл на 100 мл рабочего раствора. 

Полученный рабочий раствор красителя нанесите на фиксированные 

(метанолом или раствором Май-Грюнвальда) и высушенные мазки крови. 

Выдержать 30-60 мин. Промыть препараты дистиллированной водой 

(желательно с рН=6,4-6,8), высушить и микроскопировать.

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ:

Для приготовления рабочего раствора красителя необходимо использование забуференной (рН 6,8 – 7, 2) воды. Для этих целей можно использовать реагенты производства НПФ «АБРИС+» «Диахим-ГемиСтейн-Буфер-Г» кат.№ 463 или кат.№ 464 , или приготовить самостоятельно.

Приготовление забуференной воды:

Вариант 1: Использовать «Диахим-ГемиСтейн-Буфер-Г», кат.№ 463. Приготовить согласно инструкции по применению.

Вариант 2: Использовать «Диахим-ГемиСтейн-Буфер-Г», кат.№ 464. Приготовить согласно инструкции по применению.

Вариант 3: Использовать «Диахим-Буфер-М» (для комплекта кат. № 435/484). Приготовить согласно инструкции по применению.

Вариант 4: Взвесить на аналитических весах с точностью ± 0,01 г 9,50 г натрия фосфорнокислого двузамещенного безводного или 22,70 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного; навеску перенести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл, добавить 900 мл дистиллированной воды, перемешать до растворения, довести до 1000 мл дистиллированной водой и тщательно перемешать (раствор 1).

Взвесить на аналитических весах с точностью ± 0,01 г 9,07 г калия фосфорнокислого однозамещенного; навеску внести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл, добавить 900 мл дистиллированной воды, перемешать до растворения, довести до 1000 мл дистиллированной водой и тщательно перемешать (раствор 2).

Внести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл 63 мл раствора 1 и 37 мл раствора 2, довести до 1000 мл дистиллированной водой и определить рН полученной забуференной воды на рН-метре; рН должен находиться в диапазоне 6,8 — 7,2.

Полученную забуференную воду можно хранить при комнатной температуре (+18 — 25°С).

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА (методика окраски):

Мазки необходимо зафиксировать фиксатором-красителем по Май-Грюнвальду или типа Лейшмана в течение 2-3 минут. Непосредственно перед окраской приготовить рабочий раствор: смешать краситель с забуференной водой в соотношении 1:10 — 1:15 и профильтровать.

ВНИМАНИЕ! Увеличение концентрации красителя в рабочем растворе снижает красящие свойства раствора! Соблюдайте диапазон разведения!

Полученный рабочий раствор красителя можно использовать в течение 6 часов.

Зафиксированные мазки крови БЕЗ ПРОМЫВКИ ПОСЛЕ ФИКСАЦИИ поместить в рабочий раствор красителя, по истечении 10-15 мин препараты промыть проточной водой 3-5 сек, высушить на воздухе и микроскопировать.

РЕЗУЛЬТАТ ОКРАСКИ:

Окраска форменных элементов крови должна быть следующей:

эритроциты — розовые, розовые с серым или бежевым оттенком, бежево-коричневые;

тромбоциты — розово-фиолетовые или фиолетовые;

ядра лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов — фиолетовые;

цитоплазма лимфоцитов — голубая, серо-голубая или сине-голубая;

цитоплазма моноцитов — серо-голубая;

цитоплазма нейтрофилов — бледно-розовая или розово-серая;

зернистость нейтрофилов — фиолетовая или красно-фиолетовая;

зернистость эозинофилов — оранжево-красная, розово-красная или розово-фиолетовая;

зернистость базофилов — фиолетовая.

Метод окраски микропрепаратов по Романовскому-Гимзе — это один из самых популярных методов окрашивания бактерий, простейших, а так же клеточных структур и тканей самых различной структуры. Данный м метод используется в том числе и для исследований крови посредством световой оптической микроскопии. Окраска по Пинчуну-Романовского-Гимзе впервые была предложена в 1904 году Густавом Гимзой.

Посредством данного метода окраске подлежат ацидофильные образования в разные оттенки красного цвета. Образования базофильного характера окрашиваются в цвет от пурпурного до синего.

Момент окрашивания:

Перед началом окрашивания готовый краситель жидкого вида разводят в дистиллированной воде в соотношении 1-2 капель красителя на 1 мг воды. Мазки окрашиваются во влажной камере при температуре  37 °C в течение 20-25 минут. После завершения окраски мазки промываются проточной водой, сушатся на воздухе, а затем исследуются с помощью масляных импрессий.

Красящую смесь Романовского-Гимзы, в основе которой имеется краска Романовского Райта, растворяют в виде порошка в смеси равноправных объемах глицерина и метилового спирта в соотношении 800 мг красителя к 100 мл растворителя.

Краситель обладает плохой растворимостью, поэтому его следует перетереть  с растворителем  в количественном соотношении 300мг к 100 мг, затем, добавлять краситель при этом постоянно помешивать массу до получения требуемой концентрации. На приготовление красителя требуется несколько дней. Следует акцентировать внимание на том, что в качестве растворителей нужно применять химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как именно примеси являются причиной ухудшения свойств красителя. 100 % этиловый спирт может стать идеальной заменой метиловому спирту. Готовую красящую смесь следует хранить в плотно закрытом  сосуде в прохладном сухом месте.

Специальный раствор Гимза. Составляющие красителя:

• Азур 1 — 3,772 г
• Эозин — 2,165 г
• Метиленовая синька (медиц.) — 1,563 г
• Метанол (ЧДА) — 750,0 мл
• Глицерин (ЧДА) — 256,0 мл

Метод окрашивания:

Мазки, акцентированные в метиловом спирте, окрашивают на протяжении 40-120 минут раствором, в состав которого входят 1 мл приготовленной краски жидкой формы, 2 мл главного буферного раствора и 47 мл дистиллированной воды. Используют фосфатный буфер, на рН которого оказывает влияние вид мазка:

• мазок костного мозга — 5,8 — 6,0;
• мазок крови — 6,4 — 6,5;
• выявление простейших — 6,8;
• малярийные плазмодия — 7,0 — 7,2.

Ополаскивание проводят в дистиллированной воде, затем высушивают и изучают при иммерсии.

Результаты окрашивания:

Амастиготы Leishmania tropica, находящиеся – в макрофагах. Увеличение 10×100, окрашивание по Гимзе.

Бактерии вследствие окрашивания приобретают фиолетово-красный оттенок, цитоплазма клеток —  голубой цвет, ядра —  красный. Вследствие окраски простейших их цитоплазма становится голубого цвета, а ядра — красно-фиолетового.

Картинка с сайта: maximed-dv.ru

Картинка с сайта: maximed-dv.ru

Азур эозин — краситель по Романовскому, изготовленный согласно ТУ 9398-003-29508133-2011.
Состав предназначен для окраски форменных элементов крови.
Одного литра Азур эозина для гематологии по Романовскому достаточно на окрашивание до 6 тысяч мазков крови, при условии разведения в 20 раз.
Для приготовления готового раствора Азур эозина рекомендуется растворить вещество в дистиллированной воде в пропорции 1:20.
Хранение Азур эозина с буфером по Романовскому осуществляется в темном месте в температурном диапазоне от 00 до 250С. Состав необходимо изолировать от щелочей и кислот. Приготовленный раствор по Романовскому может храниться до 6 часов в условиях комнатной температуры.

Картинка с сайта: maximed-dv.ru

Характеристики