Бульон фрейзера оболенск инструкция

Основа бульона для обогащения листерий

Listeria Enrichment Broth Base (Fraser)

Назначение

Жидкая культуральная среда используемая для выделения и детекции листерий, согласно стандартам ISO.

Описание

Бульонная основа для обогащения листерий представляет собой модификацию Fraser и Sparber  среды Вермонтского университета (UVM). Эта среда одобрена USDA-FSIS. За счет включения хлорида лития, среда подавляет развитие энтерококков, которые также могут гидролизовать эскулин, как  и листерии. Любое почернение среды, обусловленное реакцией эскулетина, образующегося в результате гидролиза эскулина, при наличии в среде железа, можно считать указывающим на наличие в пробе листерий.  Цитрат железа также способствует выявлению L. monocytogenes.

Приготовление

Растворить 57,4  г порошка в 1 л дистиллированной воды. Разлить по 500 мл в флаконы и стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС. Остудить до 50°C. Асептически добавить 1 флакон Добавку цитрат железистого аммония (Артикул. 06-112-LYO) и 1 флакон Селективной добавки Listeria (Артикул 06-111CASE или 06-111-LYO) хорошо перемешать. Чтобы получить половину концентрации бульона Фрэйзерам добавьте 2 флакона Добавки цитрат железистого аммония (Артикул 06-112-LYO) и 1 флакон Селективной добавки Listeria (Артикул 06-111CASE или 06-111-LYO) в 1000 мл Основы бульона. Акрифлавин и налидиксовая кислота редуцируются в ½ концентрации бульона.

Примечание: Готовую среду (бульон + добавка) следует хранить в защищенном от света месте, так как на свету образуются комплексы, окисляемые акрифлавином, которые подавляют рост листерий.

Техника посева

Хотя некоторые авторы применяют бульон Фразера  в качестве единственной накопительной среды, было доказано, что лучшие результаты могут быть получены, если она применяется на этапе вторичного обогащения:

— Инокулируют образец в бульон для первичного обогащения (UVM I, артикул 02-472 или бульон Ловетта, артикул 02-498) и инкубируют в течение 18-24 часов.

-Аликвоты по 0,1 мл инокулируют в пробирки с 10 мл бульона Фразера и инкубируют в течение 24-28 часов.

-Пробирки с почерневшей средой считаются предположительно положительными и должны быть пересеяны на твердую среду для выделения и подтверждения, напр., агаровую основу Оксфорд (Артикул 01-471), или агаровую основу Палкам (Артикул 01-470), или среду ALOA. Оставшиеся прозрачными пробирки считаются отрицательными и могут быть выброшены или проинкубированы еще 24 часа, если есть какие-либо сомнения.

Необходимые добавки

Селективная добавка Listeria (Listeria Selective Supplement for Secondary Enrichment (UVMII/Fraser)) (Артикул 06-111CASE/ 06-111-LYO)

Флакон содержит:

Необходимое количество на 500 мл среды.

Натриевая соль налидиксовой кислоты…………10,00 мг

Акрифлавин.…………………………………………..……..12,50 мг

Дистиллированная вода (Растворитель)

Добавка цитрат железистого аммония (Артикул 06-112-LYO)

Флакон содержит:

Необходимое количество на 500 мл среды.

Железистый аммония цитрат………………..………250,00 мг

Дистиллированная вода (Растворитель)

Селективная добавка Listeria (Listeria Selective Supplement for Primary Enrichment (Half Fraser) (Артикул 06-145-LYO))

Флакон содержит:

Необходимое количество на 500 мл среды.

Натриевая соль налидиксовой кислоты……..…..5,00 мг

Акрифлавин………………………………….…………..……6,20 мг

Железистый аммония цитрат…………………………250,00 мг

Дистиллированная вода (Растворитель)

Селективная добавка Listeria (Listeria Selective Supplement for Primary Enrichment (Half Fraser) (Артикул 06-136-LYO))

Флакон содержит:

Необходимое количество на 225 мл среды.

Натриевая соль налидиксовой кислоты…………..2,25 мг

Акрифлавин……………………………………………..…….2,80 мг

Железистый аммония цитрат……………………..112,50 мг

Дистиллированная вода (Растворитель)

Хранение

Среда предназначена только для лабораторного использования. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности <60%)

Контроль качества

Температура инкубации:  35°C ± 2,0

Время инкубации: 24-48 часов

Инокуляция: 10-100 КОЕ (Продуктивность)/ 1.000-10.000 КОЕ (Селективность).

Левая: Неинокулированная пробирка (контроль)

Центральная: Listeria monocytogenes ATCC 19112

Правая:Listeria monocytogenes ATCC 19112

Информация для заказа: